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【求助】怎么又跑成这个样子？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-2-03 11:01 作者: nut6694 来源: 分析测试百科网

最近用凯基的全蛋白提取试剂盒提取了样品，跑胶。结果分离胶15%，浓缩胶5%，结果如上图。自己感觉可能是蛋白浓度太浓，降低了浓度，分离胶10%，浓缩胶5%（目的蛋白42Kda）,跑出的结果如下图。（电压为60V,80V）.
请各位多指教！谢谢了！

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【求助】怎么又跑成这个样子？

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最新回复

gmjghh (2014-2-03 11:02:54)

样品溶解的不好，建议上样前离心。
hustwb (2014-2-03 11:03:13)

42Kd的蛋白10%分离胶不适合，几乎就在溴酚蓝的位置，胶跑得这么丑一方面象楼上说的，蛋白量过大，最主要的我还是怀疑你的分离胶BUFFER可能有问题，先测PH值吧
jujuba (2014-2-03 11:05:47)

有可能配胶的时候不够均匀，建议多摇晃，试试看。
nut6694 (2014-2-03 11:06:16)

这个礼拜从各方面对SDS-PAGE的影响因素进行了分析,但跑出来还是让人失望,还请各位多多指教!!!
1.样品重新提取,组织裂解充分,13200转,离心40min.
2.分离胶和浓缩胶凝乐3h.
3.上样缓冲液在使用前也离心过,蛋白5min,100度变性后也离心过.
4.Tris 系统新配的,以及各种试剂的PH都没有错.

96077752.jpg
txwuyan (2014-2-03 11:06:36)

我看晕了~~~你想跑成什么样子？我不知道你为什么失望~~~
veiwu (2014-2-03 11:06:53)

样品超声15s。
适当降低浓度，调整到7ug/ul以下。
seagate (2014-2-03 11:10:34)

你可以加长浓缩胶的长度试试
12xunmei (2014-2-03 11:10:51)

已经很好可以用了，不知LZ要跑成什么样子。
不影响下一步实验就OK啊
cwcwcww (2014-2-03 11:14:09)

想起一件事情
别人做培养细胞的很干净
水生生物的和你的差不多
还是样品差异
yes4 (2014-2-03 11:14:43)

我感觉是样品太粘了的缘故，可以降低样品浓度加上样前10分钟离心。试试吧。
abc816 (2014-2-03 11:15:00)

分离胶和浓缩胶凝固的时间是不是太长了点。我一般分离胶30分钟内，浓缩胶1个小时多点。
另外你降低上样浓度试试看。我上样浓度25ug/20ul,条带已经很明显了。50ug/20ul上样的时候，就跑的不好。
阿凡提 (2014-2-03 11:15:20)

以前我跑的时候也跑成过这样。原因是样品太黏或上样量太大。
另外，楼主用的marker是宽的吗？如果是200KD-6.5KD的话，一般等浓度的胶是不可能把九条带都跑全的。而且楼主是要42KD的条带，所以应该用丙烯酰胺浓度较高的胶才能分开。
feima+ (2014-2-03 11:15:41)

QUOTE:
原帖由 阿凡提 于 2014-2-3 11:15 发表

以前我跑的时候也跑成过这样。原因是样品太黏或上样量太大。
另外，楼主用的marker是宽的吗？如果是200KD-6.5KD的话，一般等浓度的胶是不可能把九条带都跑全的。而且楼主是要42KD的条带，所以应该用丙烯酰胺浓度较高的胶才 ...
最左边的就是marker ,116-14,七条带。谢谢了。