【求助】关于小分子肽的表达纯化

最新回复

• bling (2014-2-03 17:24:29)

  
  为什么不直接去合成多肽呢？
  如果纯度要求不是特别高的话，100mg可能三千多块钱吧
  比你慢慢摸条件好多了

• fqswdzd (2014-2-03 17:24:58)

  
  如果非要做重组的话就多串联表达吧。
  融合表达也可以，但15AA上游构建有你玩的了，呵呵。而且融合后目的肽段占得比例太小，终产率不高。
  分泌表达也可以尝试，只是这样的肽一般不稳定，构建的时候多考虑一些难点再下手。
  纯化还是很简单的，制备型RP-HPLC一步就可以了。

• damingxia0904 (2014-2-03 17:25:41)

  就是合成，没有二话。

• yueban-1147 (2014-2-03 17:26:05)

  
  对,可以考虑采用融合蛋白表达.

• greenbee (2014-2-03 17:26:31)

  根据你的目的确定方向，如果你只是需要这段小肽做后续功能研究，20aa以内的肽段，不管从时间还是费用上来看首选是化学合成
  如果你一定要采用细菌表达的方法，融合不推荐，串联是首选。因为融合后酶切，你的蛋白只占很少很少的一部分，太不经济了。另外细菌表达后你还要考虑鉴定纯化等因素，费时费力费钱

• shkudo (2014-2-03 17:26:57)

  QUOTE:

  原帖由 greenbee 于 2014-2-3 17:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  根据你的目的确定方向，如果你只是需要这段小肽做后续功能研究，20aa以内的肽段，不管从时间还是费用上来看首选是化学合成
  如果你一定要采用细菌表达的方法，融合不推荐，串联是首选。因为融合后酶切，你的蛋白只占很少很少的一 ...

  你好，谢谢你的建议，但是我还是想问问你，我要做细菌表达，如果做串联的话，我要注意些什么问题呢？
  还有就是我现在面临新的问题是：我要在我那段目的片段上加上一段组氨酸标签，而我的目的片段上还有三个碱性氨基酸，那我在除去组氨酸的时候，就很容易把片段也切断了，这个问题怎么解决呢？谢谢了！！！

• iii_ii (2014-2-03 17:27:21)

  
  你要做的和我差不多。我的也只有23个氨基酸。上游的载体构建我是费了不少事。好在坚持给做出来了，现在也表达出来融合蛋白。准备在做融合蛋白的纯化。后面酶切回收是有难度啊。我很愁后面呢，现在是后悔也来不及。建议你不要走融合表达这步。直接找公司合成是首先。