【求助】请教220KD蛋白 胶的浓度 及转膜条件

最新回复

• tie8 (2014-2-03 17:55:00)

  
  220KD的蛋白，10%的胶都可以出来，看看你的PAGE电泳时间够不够，有没有分开，另外，BIO-RAD的槽，100V60分钟已经可以。

• abc816 (2014-2-03 17:55:17)

  应该是还没有转上去吧，我用的是北京六一的湿转，也是200多的，要转15个小时左右呢，BIO-RAD的就不知道效率会高多少，但也不至于差这么多吧，你延长转膜时间试试吧！祝你成功！

• 兔唇 (2014-2-03 17:55:40)

  QUOTE:

  原帖由 abc816 于 2014-2-3 17:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  应该是还没有转上去吧，我用的是北京六一的湿转，也是200多的，要转15个小时左右呢，BIO-RAD的就不知道效率会高多少，但也不至于差这么多吧，你延长转膜时间试试吧！祝你成功！ ...

  
  15个小时也太夸张了。
  我做过脂肪酸合成酶（270 kD）,用6%的胶，北京六一的湿转140V衡压转3.5 h，一点问题都没有。
  建议搂住换7.5%的胶片，同时加彩虹Marker监测转印效率。

• bling (2014-2-03 17:55:59)

  
  我们这一般要转6到7个小时，转膜条件是湿转400mA BIO-RAD。

• kswl870 (2014-2-03 17:56:16)

  
  请教一下，70KDa的蛋白，湿转，天能的电转移，大概要多少的电流，多少时间啊？谢谢！

• jingling845 (2014-2-03 17:56:56)

  
  220KD也不算很大。8%只要配的是对的肯定能进胶。没用预染marker么，不然你转没转上膜你还不知道哇？merck有个预染marker最大的带是250kD，可以用来监控。