【求助】包涵体超声后沉淀很少，而且是黑色的

最新回复

• ffooll (2014-2-03 19:15:01)

  
  可能是超声强度太大，碳化所致。

• ALALA (2014-2-03 19:15:20)

  
  我也遇到了同样的问题？不知道是呢么原因 啊？

• lixi559 (2014-2-03 19:15:40)

  超声破碎的时候，外面一定要冰浴！

• huifeng0516 (2014-2-03 19:16:00)

  
  如果蛋白的表达量很少的话，超声后沉淀很少也是正常的。
  黑色是超糊了的蛋白，一般都会有一些，如果很多的话要注意一下超声条件：增加超声间隔；降低功率，少量多次；冰浴；如果浓度太大，可以稀释后超声。

• greenbee (2014-2-03 19:16:18)

  
  即使注意了以上条件 好像也是会有黑色物质的

• skytree (2014-2-03 19:16:39)

  我加了20mM咪唑缓冲液超声，45min ，发现成白色液体，而不是透明的，离心后，我按照纯化说明书纯化目的蛋白，并对包涵体进行了洗涤，跑胶后，发现包涵体中的目的蛋白量很小，可溶纯化的量也很小。怎么回事，是不是我加少了，400mL的菌体，我用12ML的缓冲液重悬超声的，请高手指点一下,xixie了

• woshituzhu (2014-2-03 19:42:08)

  我们实验室都是用20mM的Tris-HCL把离心后的菌体重悬，加点溶菌酶，冻于-20°，第二天冰浴超声，效果还不错哈，你可以试一试