【求助】膜可以封闭多久

最新回复

• whitesheep (2014-2-03 19:50:41)

  
  最长试过室温4H，不过我觉得只要你脱脂牛奶不坏，封闭多久都没问题

• feima+ (2014-2-03 19:51:03)

  
  4度
  我做过5天
  没问题
  封闭不是时间越长越好
  建议RT 30min~1h

• ssonglikihi (2014-2-03 19:51:20)

  那加叠氮钠4度呢，有影响吗

• feima+ (2014-2-03 19:51:42)

  封闭时可以加NaN3
  但是一定要在加一抗前充分清洗干净

• tudou85 (2014-2-03 19:52:30)

  封闭时可以加NaN3
  但是一定要在加一抗前充分清洗干净
  
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  加一抗前充分清洗，会不会把封闭液的蛋白全洗干净了，而使封闭起不到作用呢？每次封闭后我都不敢怎么洗膜.......

• ssonglikihi (2014-2-03 19:53:38)

  
  叠氮钠是会影响二抗的酶活性吧，也影响一抗吗？

• gogo (2014-2-03 19:53:58)

  
  封闭之后不洗也没关系，要洗的话正常的洗涤试剂和操作不会把封闭剂洗下来的，建议网上搜索相关protocol
  NaN3抑制的不是抗体，而是HRP的活性，如果涉及此标记，须漂洗充分,AP则无此问题

• bangqi_k (2014-2-03 19:54:39)

  
  我一般是5%的牛奶封闭，室温一个小时，4°二个小时吧！时间长了，背景会浅点，但是也有可能是白板！

• mickeylin (2014-2-03 19:55:35)

  
  5%的牛奶封闭RT可以一个小时，但是如果所做蛋白背景非常强则4度5-6个小时也可以的

• misswu61 (2014-2-03 19:55:57)

  我们4°C过夜，很好的，时间也不紧张。

• BUK (2014-2-03 19:58:13)

  我一般是4度过夜，37度以小时，还是不错的啦。

• qhyu (2014-2-03 19:59:20)

  
  4度过夜用过
  也室温2或3小时
  一般是5%脱脂奶粉封闭
  没用试过加叠氮钠
  但感觉封闭之后还是要洗洗的
  有一阵没洗一显影就是一片亮
  比较郁闷
  后来封闭完后用TBST洗几次就好了
  背景也不高
  如果室温封闭上摇床也不错，4度就浸泡好了

• ending (2014-2-03 19:59:42)

  
  我一般是室温下封闭2h，之后是要极度的洗膜洗干净，再行一抗孵育过夜。洗膜不会将你的蛋白洗下来，能下来的都是未结合的，不想要的。所以你还是大胆放心去洗吧。