【求助】我要做分子量180和40的western，用多少%胶？

最新回复

• fangxiang (2014-2-03 20:18:07)

  
  你的胶长度多少？

• cocacola (2014-2-03 20:18:28)

  
  胶条 有 4-7 的 和 3-10的 2种 哦 。具体 你好好 研究一下哦 。估计 不一样 分离的蛋白也不一样。我 现在正在做这个实验 但不是我亲自做 。是我和我师兄 找实验室的人员帮着做 。很多东西 那个实验员 也不说 保守的很 。我只能 给你说到此 我也是新手

• dog002 (2014-2-03 20:18:47)

  
  谢谢两位关注，我的分离胶大概有6ml左右。
  要不能不能换个内参？有没有较大点的内参呢？gapdh比actin还小，tublin也只有50多……

• dog002 (2014-2-03 20:20:05)

  
  胶怎样还能更长呢？我们实验室的只有那么长啊
  你的意思是把浓缩胶做得再短一点吗？

• hustwb (2014-2-03 20:20:51)

  不用换内参
  除了这三个你想换哪一个？
  胶长一点的话可以保留内参

• jrwyyplt (2014-2-03 20:21:12)

  
  你可以用10%的胶跑呀！！！

• ukonptp (2014-2-03 20:21:30)

  7.5%的胶就可以了，梯度胶挺麻烦的

• lorri (2014-2-03 20:22:02)

  我用了4%浓缩胶和6%分离胶，80V,100V跑了95分钟，结果让180kD的蛋白到胶的中间地带，条带倒是分得挺开的，但是40kD的蛋白却看不到了。怎样才能在一个胶上都能得到180和40的蛋白呢？
  我偶尔看到了有个叫梯度胶的，对这个我没有一点了解，但是我想能不能用梯度胶解决这个问题呢？
  那位朋友做过这样的实验或者知道怎么做？望各位western高手不吝赐教！！
  谢谢~~
  
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  用8%的分离胶，5%浓缩胶即可，我最近就在做180KDA的，可以跑出来，内参42kda，两者都可以保留，没问题，试试吧！

• sunshine039 (2014-2-03 20:22:19)

  
  就用10%的胶就可以了，我一直这么做160的蛋白和GAPDH的
  蛋白跑出来不多，位置比较靠近上端

• DDD (2014-2-03 20:22:46)

  
  试试10%的分离胶
  实在不行就跑两块，反正有ladder对照
  非要把两个条带在一个胶上么

• dog002 (2014-2-03 20:23:08)

  谢谢各位关注，我试了8%分离胶和5%浓缩胶，目的蛋白和内参都跑出来了。就是条带不是很漂亮，要不就贴上来了。谢谢~~