【求助】关于蛋白免疫印迹

最新回复

• kewanqi2011 (2014-2-03 21:59:02)

  可以分开做，也可以一起做，如果一起做的话，就要按顺序先加一种蛋白的一抗，孵育一段时间再加第二种蛋白的一抗，再孵育，最后加二抗。

• 小游abc (2014-2-03 21:59:57)

  
  我觉得还是把膜按照所需的分子量剪开，分别孵不同的一抗比较好

• caihong (2014-2-03 22:00:19)

  
  做完一个，然后用洗膜液洗掉一抗二抗，在重新封闭做第二个第三个第四个抗体，
  一张PVDF膜一般可以洗5次左右

• 8964357 (2014-2-03 22:00:40)

  
  有几种情况：1）两个蛋白大小很接近，那么一定要分开做！
  2）两个蛋白分子量差别大，可以两种蛋白的一抗同时加入孵育，这样很方便的。
  3）如果一抗来源不同，还是分开做好！

• dhpbj (2014-2-03 22:01:36)

  
  如果分子量相差很大，可根据MARKER将膜裁开为二，两张膜分别依次封牛奶、用两种蛋白的一抗孵育、清洗、加二抗，最后发光；
  如果分子量比较接近不易裁膜，则检测一种蛋白，然后充分洗膜后检测另一种蛋白。

• dongdongqiang (2014-2-03 22:01:54)

  
  到底是分子量接近分开呢 还是两种蛋白相差多分开呢
  上面两种说法不一样啊
  还有一抗不一样 为什么要分开做 ？？
  谢谢大侠说清楚点

• #问号# (2014-2-03 22:02:20)

  晕死，楼上的没明白，我总结下。
  同一组织要做两个以上的蛋白，
  1；首先确定这几种蛋白分子量多大，差距有多大，一般来说加上内参，肯定是2种以上的蛋白了。
  2：如果这些蛋白分子量很接近，在膜上就分不开多远，所以只能先加1种蛋白的1抗2抗显色再洗脱再加第2种蛋白的1抗2抗...比如一个蛋白分子量45，和内参ACTIN接近，那么就同一张膜先做目的蛋白显色完了再做内参。
  3：如果分子量离的较远，膜上就分得比较开，按照marker的距离分得较远，就把膜裁成2部分，分子量小的做内参，分子量大的为目的蛋白，分别
  同时封闭加各自的1抗2抗，这样1是省1抗，2是省时间。比如我得目的蛋白200，内参Tubulin55，分开做没问题。
  4：至于同时加2种1抗在1张膜上，这个理论和实践都有成功的例子，问题是1抗的特异性要好，种属来源有无交叉，而一般我们用的都是多克隆抗体，建议最好不要混着加，毕竟试验做着不易，别1口吃个胖子噎着了不是？