【求助】膜蛋白western实验内参的选择

最新回复

• wawa (2014-2-03 22:22:37)

  我也在作膜蛋白的表达，买GAPDH做内参，听别人说膜上不表达GAPDH,不知道该怎么办？

• mogu (2014-2-03 22:23:05)

  
  到底怎么办呢，好多文献上都是actin，所以我决定用actin,等明天有结果了再给大家汇报。

• standup (2014-2-03 22:23:22)

  
  你用总蛋白做western，不就可以用actin 或者GAPDH了嘛

• zzzz (2014-2-03 22:23:50)

  关于如何选用内参，版子里面很多经典讨论。
  您可以检索本版，我相信会找到您需要的答案。

• mogu (2014-2-03 22:24:15)

  
  我用PIERCE的膜蛋白提取试剂盒提取蛋白，最后37度水浴后溶液分为上下两层，按照说明书下层为膜蛋白，上层弃去。实际操作中我将上层和下层均用western检测actin和目的蛋白，结果都能检测到actin的表达条带，但是我在检测中发现上层液相中能够检测到膜蛋白的表达，而下层液相却不能，不明白是为什么。但可以确定膜蛋白用actin做内参是没有问题的。

• fox_79 (2014-2-03 22:25:54)

  我也用专门的膜蛋白提取试剂盒提取的膜蛋白，是可以检测到actin的表达。

• jujuba (2014-2-03 22:26:12)

  我以前是提总蛋白来WESTERN膜蛋白，最近用PIERCE的膜蛋白提取试剂盒提取蛋白，水浴后离心，弃了上层液相，只留了下层液相，用BROAND-FORD法检测蛋白浓度很高，但是电泳后胶上的蛋白很浅很细，转膜则试了很多时间点转不过去。花了N多银子买了这么贵的试剂盒，结果WB乱七八糟，心情极度郁闷
  想请教下用过膜蛋白提取试剂盒的战友：
  提取蛋白后，电泳前，是否需要对提取出的蛋白进行处理？如何处理？（下层液相为有机相，电泳前已经按说明书用B剂稀释）是否因为膜蛋白是疏水蛋白，所以电泳、转膜与总蛋白操作有差别，如何正确操作呢？
  谢谢！

• langlang (2014-2-03 22:26:39)

  我似乎看过一篇文献，里面做膜蛋白的内参选的是Na-K ATP酶。但忘记是哪篇，现在也没找到。不知有否战友看过类似的文献？

• quiqui008 (2014-2-03 22:27:05)

  
  请教下各位战友：
  膜蛋白提取试剂盒对所要提取蛋白的跨膜结构域的数目有要求麽？ 是不是太多了还不行？我的蛋白有12个Confused

• nikun230 (2014-2-03 22:28:04)

  
  相关疾病：
  头痛
  我也有这个问题，膜蛋白提取试剂盒对所要提取蛋白的跨膜结构域的数目有要求没？ 园子里看到有战友说pierce的膜蛋白试剂盒超过四个跨膜区效果就不好了，是这样吗？我的蛋白有12个跨膜区，后续实验是做co-IP，为怎么提这个膜蛋白，头疼了好久！

• sr9971 (2014-2-03 22:28:29)

  
  我也是用的pierce的膜蛋白试剂盒，提了两次都没出来，郁闷！听说这个盒子只要被冻融过一次就失效了，要注意冰箱的温度。

• leifengta (2014-2-03 22:28:46)

  我也在用pierce 的膜蛋白试剂盒，不知道会怎么样，听他家说的好可怕啊
  也有选内参的问题
  打算买个actin先试试看再说了。