【求助】10KD蛋白 WB条件？

最新回复

• 8964357 (2014-2-05 22:40:02)

  
  15%分离胶合适，浓缩胶不变，一般是8%，湿转一般不容易转过，所以80v，2h就可以了。个人认为膜很关键，一定要用你说的0.22um的膜（我用的是PVDF膜，当然NC膜也可以）。
  祝好！

• sistis (2014-2-05 22:40:21)

  
  非常感谢，但是还是没做出来，浓缩胶我的配方是H2O 0.577ml,丙烯酰胺0.102ml,Tris-HCl(PH6.8)0.104ml，10%SDS 8ul,APS 8ul, TEMED 0.8ul, 不知道是不是8%的？转膜我用的是130mA，3h,转出来条带很弥散，显然转的不好，请教高手！

• fangxiang (2014-2-05 22:41:01)

  建议15%分离胶
  最好用tricine胶

• xueyouzhang (2014-2-05 22:41:24)

  
  小蛋白在跑胶的时候，时间不要过长，容易扩散。
  当然膜最好用小孔径的，所以你的膜没有问题。
  转膜的时候要猛转，电压小了不好。这个问题以前不是有人问过过吗？
  你转的太温柔了，小蛋白都转丢了。

• vera+ (2014-2-05 22:42:01)

  QUOTE:

  原帖由 xueyouzhang 于 2014-2-5 22:41 发表
  
  小蛋白在跑胶的时候，时间不要过长，容易扩散。
  当然膜最好用小孔径的，所以你的膜没有问题。
  转膜的时候要猛转，电压小了不好。这个问题以前不是有人问过过吗？
  你转的太温柔了，小蛋白都转丢了。 ...

  
  楼上站友几次提到转膜要猛转，不是很理解，请教几个问题：这个“猛转”电压是多少？恒压还是恒流？用的是半干转还是湿转？适用于低分子量的蛋白还是高分子量的蛋白？
  另外，个人认为电压过高也不好，温度会过热，转的效果不一定太好
  个人意见，欢迎讨论。