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【求助】小分子量蛋白的Westwern转膜问题

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-2-05 22:55    作者: 鹿奔奔    来源: 分析测试百科网

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【求助】小分子量蛋白的Westwern转膜问题

我的目的蛋白分子量为12kd，电泳后半干转膜，15v，0.5hr，1hr和2hr的都做过了，用的是0.2um的PDVF膜，一般30kd和80kd的蛋白都可以检测出来，但是12kd的蛋白出不来。怎么回事呢？我为了防止过转，还特意垫了2张膜，但是2张膜上都没有12kd的条带，而大分子蛋白都能检测出来啊，为什么12kd的小蛋白就检测不出来呢？是不是转膜条件还需要改进啊？
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  • 阿敏 (2014-2-05 22:55:28)


    我WB做得不多，不过15V的电压是否太低了，小分子的或者50V 2Hr，或者
    100V1Hr

  • 阿敏 (2014-2-05 22:55:45)


    我用的是湿转

  • xevin (2014-2-05 22:56:08)


    我同学也是12KD的蛋白，用1.5mA/cm2的恒流，转了1小时20分钟，大多数都转过去了，膜还是用0.2的，你试试这种方法行不行

  • zhezhe (2014-2-05 22:56:34)

    小分子量建议半干转
    条件同楼上
    转1h即可

  • 鹿奔奔 (2014-2-05 22:59:36)

    对啊，我就是半干转啊，上面已经写了，1个小时，2个小时的都没有条带。怎么办？另外我用恒压不好吗，恒流有什么好处？

  • gogo (2014-2-05 22:59:54)


    半干
    1.2mA/cm2膜面积
    恒流
    1h
    足够
    你把转移体系说一下

  • 鹿奔奔 (2014-2-05 23:02:01)


    请问什么叫“1.5mA/cm2的恒流”啊，我的仪器上只显示总电压和总电流啊，没有“mA/cm2”这个单位啊。
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