【求助】page胶上宽下窄的原因

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-2-05 23:23 作者: vtongli 来源: 分析测试百科网

我的page胶出现上宽下窄，原因不清，请帮忙分析。胶是倒好后3小时开始跑电泳的。使用的是12.5%的胶。如果是胶收缩，但是marker却没有斜着跑，很怪！以前的胶没有这种情况。附图。
另外我使用的是masterimage扫描的偶尔出现一些纵横条纹。原因也不清。附图

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【求助】page胶上宽下窄的原因

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vtongli (2014-2-05 23:23:54)

接上面

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tie8 (2014-2-05 23:24:11)

很可能是样品溶液的离子浓度问题，因为marker没问题，说明你的电泳缓冲液是正常的，而且，这种浓度page是比较好跑的，一般要求不是非常严格，所以，推测是你的样品制备的时候，或者离子浓度有问题，或者样品浓度有问题，估计只要把蛋白样品的问题解决了，就可以跑出好看的条带了，建议可以降低样品的浓度在上样试试，希望对你有帮助
箭头儿 (2014-2-05 23:24:36)

楼上战友分析的很有道理，我也补充2点
1. 发生收缩，这个因该是你的样品中的盐离子浓度的影响，不知道是否IEF很顺利的达到了最高电压？
2. 扫描图中的垂直空白和水平空白（胶上肉眼不可见）是由于扫描仪的原因，最好重启一下，并且调整一下透射板的水平，能够解决问题。（扫描仪老化后容易出现这样的问题，到后期可能还会出现大片的颜色异常）
3. 样本上样量过大，从染色颜色上看是G250染料，但是过饱和点相当多，是否用的传统染色方法而不是BLUE SILVER？
vtongli (2014-2-05 23:24:59)

谢谢楼上。
首先电压大概在十几分钟之内就从1000V达到8000V，应该是算快的。我看只有少部分胶没有这种情况。盐离子浓度是0.2%（伯乐公司），不知道究竟是离子浓度高了还是低了。
另外，染色使用的是传统的考马斯亮蓝，染色液是R250，染色时间是3h，过饱和点可能是高丰度蛋白。
水平空白（胶上肉眼不可见）重新启动后可能没有，但是也可能出现另外的条带，还有调节透射板的水平，我不会，也不敢，在别人的实验室，怕把东西整坏了。只好找公司了。谢谢。我再换样品试一下。
vtongli (2014-2-05 23:25:51)

现在我经过摸索，发现扫描时候的水平空白或异常突起，商由于水滴的作用。即正扫描仪的起始部有水珠，而不是机械的原因，见图。

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vtongli (2014-2-05 23:26:10)

相应的扫描图为

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vtongli (2014-2-05 23:26:50)

将水珠擦拭后的图片。

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seagate (2014-2-05 23:27:38)

我的胶是上窄下宽。请教高手解答。
普通page，4％浓缩胶，10％分离胶，100V，2h。看marker还好，不过marker上样也就7ul（省啊），蛋白上样20/30ul，都有一点扩散，有时候几个带都连到一起去了，但是高分子量（比如120－160kd）的就很好。
october7 (2014-2-05 23:28:07)

我的胶是上窄下宽。请教高手解答。
普通page，4％浓缩胶，10％分离胶，100V，2h。看marker还好，不过marker上样也就7ul（省啊），蛋白上样20/30ul，都有一点扩散，有时候几个带都连到一起去了，但是高分子量（比如120－160kd）的就很好。

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我的胶也会出现上窄下宽的喇叭口，也想请各位高手帮忙解答。
vtongli (2014-2-05 23:28:52)

现在我发现两性电解质的浓度低，比如小于0.05%（百乐），就容易出现上宽下窄。在0.1-0.2%间要好些。附图，biaolyte浓度0.1%。

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