【求助】信号通路蛋白western问题

最新回复

• koook5695 (2014-2-07 20:55:56)

  
  可以，但是效果稍微差些。
  20ug少了一点，30-50ug吧。

• 小螺号 (2014-2-07 20:56:15)

  
  20ug有点少。同一张膜可以发不同的抗体，但个人觉得做的次数越多，条带会的越变弱，尤其是含量少的蛋白。我一般做的时候先发含量少的蛋白，再发含量多的，最后发内参，但一张膜最多只用4次。

• join (2014-2-07 20:56:35)

  请问洗脱方法怎样？是否要买特定的膜洗脱液？

• misswu61 (2014-2-07 20:56:57)

  
  抗体洗脱液我是自己配的，甘氨酸 1.875g，SDS 10g，浓盐酸2.5ml，加水1000ml。

• bling (2014-2-07 20:57:22)

  
  我和楼主做的同样的蛋白，也尝试过用洗脱液，结果洗脱后连内参的条带也变得很弱了。做了多次试验，总蛋白ERK,JNK条带很好，但磷酸化一直有很多杂带，目的条带不很清楚，郁闷中。另外请教楼主一个问题，P38的分子量是多少啊？我的说明书上写的43KD，但一位专家级的人物说应该是38KD,而且我也在小于43KD的位置做出了比较清楚的条带，但却不敢确定是否是目的条带。

• jiushikeshui371 (2014-2-07 20:57:42)

  不行吧，erk和p-erk的目的蛋白在一个分子量上，而且还是两条带，这样做会相互重叠很难分清结果谁是谁非啦。
  我们一般是把分子量有一定差距的抗体在一张膜上做，不用洗脱液，只需要分两次孵育抗体就可以了，第一次发光后，直接孵上第二种抗体，过夜，第二天再发光。
  分子量一样的抗体，或者相离很近的抗体，不建议用这种方法，会混淆结果的。