【求助】SDS-PAGE样品无法进入分离胶

最新回复

• shenkunjie (2014-2-08 09:35:16)

  
  胶有没有配错，Acr/bis是不是比较新鲜，提高电压试试

• kulee (2014-2-08 09:35:39)

  
  是不是样品中沉淀比较多，上样前离心一下看看

• yjf1026 (2014-2-08 09:40:42)

  样品中沉淀比较多

• duoduo (2014-2-08 09:41:01)

  
  非常感谢，我再试一试，看看结果如何？请问除了样品沉淀过多及胶配制错误（浓度配制过大，样品蛋白也大）以外，还可能有其他原因吗？谢谢解答呵

• u234 (2014-2-08 09:41:40)

  
  我想还有的原因就是你的缓冲液的配方，我们一般要加入甘油，已增加样品的重量，如果没有的话样品就不能进入到分离胶。

• u234 (2014-2-08 09:42:03)

  
  "我想还有的原因就是你的缓冲液的配方，我们一般要加入甘油，已增加样品的重量，如果没有的话样品就不能进入到分离胶。 "
  请问版主，你说的缓冲液是指样品缓冲液吧，为什么不加甘油，样品就不能进入分离胶呢？对不起阿，我没太做过SDS，请解答详细些，好吗？
  还有就是，我发现我的蛋白marker的泳道一条带也没有哦，但标准蛋白（31KD左右）却又有条带哦？其他样品泳道只有少数有一两条带，并且这些条带都比31KD要大（这是不是排除了分离胶浓度过大的推测）。

  
  49652489.jpg

• kuohao17 (2014-2-08 09:42:24)

  
  你的问题应该是缓冲液有问题，最可能的是ph值的问题
  "我想还有的原因就是你的缓冲液的配方，我们一般要加入甘油，已增加样品的重量，如果没有的话样品就不能进入到分离胶。 "
  甘油是loading buffer中应该加的

• duoduo (2014-2-08 09:42:47)

  缓冲液的PH值问题，在什么情况下可导致这种结果？可以详细些吗？谢谢

• kuohao17 (2014-2-08 09:43:29)

  
  比较赞同楼上的说话！可能是分离胶的pH存在问题，样品在你的分离胶pH情况下不带电荷，所以无法进入分离胶~

• duoduo (2014-2-08 09:43:50)

  谢谢各位了，初步结论是：样品含沉淀且变性未彻底。以下是改进后的电泳图

  
  92435096.jpg

• wood533 (2014-2-08 09:44:26)

  补充一点 蛋白上样量过大也会引起蛋白凝聚 堵在浓缩胶和分离胶之间 个人经验 单个lane的上样量不要超过150ug