【求助】请问多种细胞裂解液配方！！

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-2-08 16:56 作者: bs4665 来源: 分析测试百科网

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【求助】请问多种细胞裂解液配方！！

一直以来用2*SDS提取蛋白质，最近一直做不出来，都三个月了，想换方法，我们实验室东西好多，加上自己经费的不多，所以不想去买试剂盒，想自己配，但又不知道有哪些配方可以用，请各位高手告诉几种了，谢谢，再谢谢！！！！
各位好心人，帮帮忙了！

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最新回复

shenkunjie (2014-2-08 16:57:23)

你可以到公司查裂解液的配方，或者是相关文献上都有的~~~~
xingyi08 (2014-2-08 16:57:58)

以下是从博士德网站获得的裂解液配方，其中RIPA裂解体系是我常用的。不过，RIPA裂解体系中的tris我用的ph7.6，蛋白酶抑制剂用的是roche的cocktail。
裂解液的制备：
组织裂解液（全细胞蛋白提取）：1：Tris-HCL50mmoL/L(PH7.4) 2: Nacl 150 mmoL/L 3: 去氧胆酸钠 0.25% 4：NP-40或Triton-x-100 1% 5: EDTA 1 mmoL/L 6：PMSF 1 mmoL/L 7：Aprotinin1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作用不持久，要使用前加入。
RIPA裂解体系： 150 mmoL/L Nacl， 1.0% NP-40或Triton-x-100 ，0.5%脱氧胆酸钠， 0.1% SDS， 50 mmoL/L Tris( ph8.0)。
bs4665 (2014-2-08 16:58:30)

谢谢楼上的两位,只是我看到文献上到处都比较乱,不知道哪种好点,所以在这里发帖问了,谢谢了,我找找看,好象有的东西我们实验室还是没有的,比如蛋白酶抑制剂,这个哪里可以买到呀?谢谢!!!
xingyi08 (2014-2-08 16:59:13)

很多试剂公司有代理，几十元一小块，按照说明书用去离子水溶解了就成了7倍的母液，用时稀释7倍就行了。很方便。
daod (2014-2-08 16:59:41)

RIPA提取蛋白问题不大。我提取过肝脏胞浆蛋白和微粒体蛋白，没有问题；我们科室提取过细胞骨架蛋白（神经丝），也是可以的。
其实蛋白提取液成分大同小异。总的来说只要有trition 脱氧胆酸钠有的含有sds，这些东西就能裂解细胞了。
RIPA可以自己配，也可以买，不是很贵。
daod (2014-2-08 17:00:03)

cocktail可以从网上搜索一下。我买的是Calbiochem的。
bs4665 (2014-2-08 17:01:01)

恩，谢谢大家，现在从网上还了解到这RIPA提取的蛋白质不能用Bradford法来定量了.但又有人说没事,说只有没有N类就可以定量,再次请问大家是这样的吗?
谢谢!!!
remenb (2014-2-08 17:02:04)

如果是在做WB，直接用上样缓冲液100度煮上10分钟也行！
bs4665 (2014-2-08 17:02:41)

我是在做WB，可是怎么煮呀，你能不能告诉我一个比较详细的步骤呀，谢谢。。。。。