【求助】western加入显色液后没有一点荧光

最新回复

• ztonyc (2014-2-08 20:54:31)

  
  抗体放在-20降解速度相对是很慢的，不必担心。你说的应该是ECL显色吧，膜上没有荧光有时是因为你目的蛋白的丰度较低，或一抗二抗的浓度和孵育时间不是很合适造成的。但是，没有荧光并不意味着没有结果，你可以将片子的曝光时间延长，显影定影的时间也可适当的延长，最后片子上也会出现理想的结果。我做实验时，就有一个目的蛋白是这种情况，结果也挺好的。祝好运！

• njkph (2014-2-08 20:56:06)

  
  谢谢你的帮助 我一抗 二抗的浓度及孵育时间和一个星期前一样 没有改变 。一星期前 荧光很强 经过曝光 显影 定影后 结果很好。现在突然没有一点荧光 就不知道是何原因 我会采取你的意见做做看

• bluelake (2014-2-08 20:57:02)

  这个跟刚才那个问题是反的。
  那我再告诉你，你多花一点钱，买PERKIN的显色剂就有了

• panda王 (2014-2-08 20:58:03)

  QUOTE:

  原帖由 bluelake 于 2014-2-8 20:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  这个跟刚才那个问题是反的。
  那我再告诉你，你多花一点钱，买PERKIN的显色剂就有了

  
  是吗？
  你说的太绝对了，如果可能的话，还望说下推荐的理由。

• jiushikeshui371 (2014-2-08 20:58:35)

  可以延长曝光时间，有时可长达几个小时，可先半小时试试。另外可能蛋白浓度不够，或显色液敏感度不够。可换用个好一点的。如pierce、millpore的。

• fqswdzd (2014-2-08 21:00:30)

  
  我做这个发现一抗二抗时间还跟温度有关，现在气温低了可能时间要延长。我不同意楼上延长曝光时间到几个小时的做法，因为根本没用，荧光在不长的时间里是要催灭的，10分钟差不多了。适当加长显影的时间或者提高显影液的温度。
  还想问一下你的膜是不是蛋白都转上了，染膜效果怎么样？

• njkph (2014-2-08 21:00:52)

  
  我想最可能的问题是蛋白没有转上去。我发现电泳的时候 在分离胶里如果不是跑在一条线上 就做不出来。我做了几次都这样。至于为什么有时候不在一条线上 我也不知道。另外 蛋白是新提的 。方法以及整个试验条件和以前都没其他变化。总之 有时候 加入AB液后条带很亮，有时候是什么都看不见。