【求助】如何将这两种分子量相近的蛋白分开？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-2-09 00:45 作者: she 来源: 分析测试百科网

我提了蛋白后过sephadexG50柱子后取单峰跑电泳（tricine-sds-page）显示有2条带如图所示（最左边为marker，上面一条为20KD，下面一条为14.4KD，右边两个泳道为俺的样品），跑HPLC也显示有2个峰，因为分子量实在相差太小，不知道有什么方法可以将它们分开，急求助！！

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【求助】如何将这两种分子量相近的蛋白分开？

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txwuyan (2014-2-09 00:48:01)

这两个蛋白分子量相差太小，SEC分开的可能性很小，除非是那种柱效特别高的预装柱。
可以尝试别的方法啊，比如离子交换一类的，这两个蛋白的PI总有差距的吧。
实在不行就上RP吧，这个分开的可能性是比较大的。但要真的用RP的话就不用先上SEC了，可以把SEC放在最后用于polishing，尤其你G75用起来实在是有点慢。
14.4K，这个数字好熟悉。要是溶菌酶的话就好分了，一个SP或是cm就好了，呵呵，一家之言。
btw，这个蛋白用不着tricine的，普通的page就够了。
huifeng0516 (2014-2-09 00:48:27)

这两个条带都是你的蛋白么？
我的意思是：是否同一蛋白的降解的产物，陈旧样品比新鲜样品中小条带更多的话，极可能是。如果是的话，分离没有什么意义。
是否降解产物，还可以针对你的序列进行分析。
she (2014-2-09 00:49:07)

弱弱的问一下RP是什么东东？
daod (2014-2-09 00:49:40)

QUOTE:
原帖由 she 于 2014-2-9 00:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
弱弱的问一下RP是什么东东？
RP 反相色谱（reversed phase chromatography）
she (2014-2-09 00:50:16)

反相色谱怎么做呢？介质是什么啊？请指教！
vvmmoy (2014-2-09 00:50:44)

QUOTE:
原帖由 she 于 2014-2-9 00:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
反相色谱怎么做呢？介质是什么啊？请指教！

常用反相色谱介质为GE的SOURCE 30 RPC，或SOURCE 15 RPC，后一个分辨率更高一点，但反压更大，对柱及设备要求更高。
怎么做可看介质的说明书，一般是普通BUFFER上样，有机溶剂洗脱，常用异丙醇或乙腈。
she (2014-2-09 00:51:05)

唉，我大概明白了好像是反相高效液相，唉，单位比较穷，没这设备啊！
脱水萝卜 (2014-2-09 00:51:55)

反相层析好像收率不高，且对不稳定的蛋白影响较大，尽量不要选择。