【求助】SDS-PAGE Tricine系统，分离胶底部崎岖不平

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-2-10 15:53 作者: junjie05 来源: 分析测试百科网

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【求助】SDS-PAGE Tricine系统，分离胶底部崎岖不平

做了几次Tricine系统的SDS-PAGE，都出现了分离胶底部不平，可见明显的高低起伏的波浪状，蛋白泳动到这里也不能保持水平了，甚至过不去了，请问是什么原因？是下面的胶聚合的不好吗？望大家赐教，谢谢！

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mimili_901 (2014-2-10 15:53:43)

目前你跑出来的marker,最小分子量的是多少？
注意阳极和阴极缓冲液的PH,要准。20mA,3h.
kulee (2014-2-10 15:54:02)

是不是胶版底部的缝里有气泡啊？看第二幅图右手边的跑得都挺好的，我觉得不应该是buffer的问题。也有可能是胶聚合的不均匀，我以前做的时候分离胶通常是聚合过夜的
junjie05 (2014-2-10 15:54:55)

谢谢上面两位的分析。我用的是GE的低分子量Marker, 最小一条带是14.4kD, 比较清晰，请问fishbody 这有什么关系吗？20mA,3h：你的意思是用很低的电流跑吗（时间长一点）？
mimili_901 (2014-2-10 15:56:39)

我不知道你是用什么条件跑的。tricine 的电泳时间都比较长。
wmp1234 (2014-2-10 15:56:56)

请问一下楼主跑这个TRICINE电泳的分离胶和浓缩胶的浓度是多少的？中间加没有加夹层胶．
junjie05 (2014-2-10 15:59:21)

QUOTE:
原帖由 wmp1234 于 2014-2-10 15:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
请问一下楼主跑这个TRICINE电泳的分离胶和浓缩胶的浓度是多少的？中间加没有加夹层胶．
我是按套路来的，stacking: 4%, separating 10%, 没有夹层胶。先用30mA, 大约0.5h,等样品进入分离胶后 50mA 1-2h跑完，这个不算太大吧，电极buffer用手摸不是很热。
我现在自己很怀疑是不是底部在去胶条时进去空气了（北京六一的电泳系统），今天做的胶底部出现了更大的波纹，郁闷啊。谢谢大家了
tangxin_80 (2014-2-10 16:00:48)

1、注意阳极的PH值，
2，电流稍大，10mA浓缩胶，30mA分离胶或者30V，100V
小分子要跑得慢一些，估计至少要4-5h
分离胶一般是16.5%的，夹层胶一般是10%的
PINK (2014-2-10 16:02:37)

平常做电泳没见过您出现的这种问题，如果有条件的话建议你用进口的电泳槽试试，还有你试试分离胶１６.５％，浓缩胶４％　夹层胶１０％的不连续的梯度胶，我平时跑１００Ｖ电压大概得４个小时，Tricine－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ一般是用来分离分子量低于１０ＫＤＡ的小肽．