【求助】蛋白结晶

最新回复

• 阿司匹林 (2014-2-10 16:29:51)

  
  要看你要筛选多少条件，蛋白最好是越多越好，多多益善

• ukonptp (2014-2-10 16:30:20)

  
  用融合蛋白做结晶可以吗？
  我的融合蛋白是可容的
  一用酶切开，目的蛋白就沉淀

• luoliqiong (2014-2-10 16:31:31)

  我做的也是融合蛋白，不幸的是包含体，现在正在处理

• hold住 (2014-2-10 16:31:51)

  
  相对于蛋白质结晶，其上游工作（克隆，表达，测活，纯化）难度甚小，比较保险的方法是普遍撒网，重点打鱼。
  比如研究酵母结构基因组的实验室，Institut de Biochimie et Biophysique Moléculaire et Cellulaire, Université de Paris-Sud, Orsay, France.，在 2007年发表的文章表明，（cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=pubmed&cmd=search&term=Cloning'),%20Production,%20and%20Purification%20of%20Proteins%20Medium%20Scale%20Structural%20Genomics%20Project），他们实验室克隆了 240 个 ORF，其中 82% 能在大肠杆菌表达，61% 是可溶的，他们纯化了 58 个蛋白质，有 12 个蛋白质的晶体结构已经获知，另外还有6个正在优化结晶条件。
  如果算 18 个晶体的话，成功率也只有 7.5% ，所以，一上来盯住一个蛋白质不放，恐怕是有点风险的。

• ha111 (2014-2-10 16:32:17)

  
  顶,我做了一趟,可惜没有拿到晶体,再来继续挑基因做吧...呜呼,毕业有点悬阿

• standbyme (2014-2-10 16:32:35)

  我用pET28a做的载体，蛋白表达量也还行，镍柱纯化后，SDS-PAGE时有几条杂带，下面想做一下晶体，是不是要进一步纯化啊？下面我该怎么做呢，没头绪了。
  我把这个蛋白也构建到了pET32a中，我构建到pET32a中后蛋白表达量比在pET28a中多，纯化后也SDS-PAGE也只有一条杂带，不过听说pET32a中的S-Tag跟目的蛋白融合表达了，不易结晶，我改选哪个来继续做呢？

• ha111 (2014-2-10 16:33:00)

  绝对不能盯一个蛋白做，有些蛋白，只能等技术革命了之后再说吧