【求助】wb做不出来，大家帮忙分析一下吧！

最新回复

• fox_79 (2014-2-10 22:25:44)

  
  应该有表达的，你把你的条件告诉大家才能分析啊！

• lyxsqs (2014-2-10 22:26:05)

  
  内参每次都出来，整个wb体系应该没有问题的吧。现在主要问题就是我的细胞不表达目的蛋白还是一抗有问题？

• ero11 (2014-2-10 22:28:22)

  
  "找到一抗说明书上的阳性细胞，也没有做出来，内参都是很好的"
  是不是就是说明你的一抗有问题呢？
  有mRNA≠protein

• cocacola (2014-2-10 22:28:53)

  
  "找到一抗说明书上的阳性细胞，也没有做出来，内参都是很好的"
  是不是就是说明你的一抗有问题呢？
  有mRNA≠protein

• abc816 (2014-2-10 22:29:23)

  
  说明书上的阳性细胞都没做出来，不是抗体的毛病是什么？
  要么就是你的方法步骤有问题，试试改变blocking buffer的种类，浓度
  还有一点，pcr做出来有，未必蛋白质就有，这两者在表达时间上有所不同，且有时表达量上不成正比。

• vcve (2014-2-10 22:29:47)

  
  嗯，RNA有和蛋白质不一样的，阳性细胞都没做出来应该是一抗的问题。

• owanaka (2014-2-10 22:30:11)

  换掉santa的一抗！

• dior (2014-2-10 22:30:35)

  
  我不管买什么抗体，拿到抗体就会用阳性细胞先摸条件做一个梯度，一般做3个浓度
  它推荐的最高浓度，最低浓度，中间一个浓度，二抗用以前做其他实验做的很好的二抗
  另外根据目的蛋白大小，要适当调整条件的

• pou (2014-2-10 22:31:34)

  
  是不是你的蛋白表达量太少了，可以将你认为表达的细胞PAGE看看，是不是在应该出现表达蛋白的地方有带，大致估计一下浓度。Santa的抗体总的来说应该还是不错的。但是试验做不出来的时候原因往往是很多的。慢慢找，一个一个的排除。

• KGZ564 (2014-2-10 22:31:55)

  
  我和LZ碰到的情况一样，我实验室另外一个师兄做的一个基因也是这样。觉得有点不可思议，mRNA水平有，为什么蛋白水平没有呢。WB我也反复做了好多次，一直做不出来。LZ如果解决你的问题了的话，希望能及时的通告一声，我们也好找找原因。