【求助】关于小分子蛋白转膜的问题

最新回复

• zhenxin (2014-2-11 16:41:06)

  
  我认为既然你的marker已经电转成功，所以我认为有两种情况值得考虑：（1）如果是大于目的蛋白条带分子大小的标准marker条带电转成功的话，那么蛋白未呈现膜上可以判定是电转过头，将目的蛋白转出PVDF膜外了，所以此时应减少转膜时间或降低转膜电压；（2）如果是小于目的蛋白条带分子大小的标准marker条带电转成功的话，那么蛋白未呈现PVDF膜上的原因可以判定为电转时间太短，此时可以适当延长电转时间或增大电转电压。但根据我的实验经验，感觉到第一种情况的可能性更大。

• queen (2014-2-11 16:46:04)

  我的marker转的不是很清楚，我试过很多条件了，摸索了很久，不知道哪里出问题了。
  在转膜之前，我做过考马斯亮蓝快速染色，蛋白很清楚。
  PVDF膜要经过什么特殊处理吗？我是先用三蒸水浸泡，再用转移缓冲液浸泡的。
  膜的孔径是0.2的。
  谢谢你.

• flower-201 (2014-2-11 16:56:55)

  
  相关疾病：
  水疱
  PVDF膜在转膜前不能用水泡，要用甲醇浸泡！

• orangecake (2014-2-11 16:57:53)

  
  相关疾病：
  水疱
  PVDF膜在转膜前不能用水泡，要用甲醇浸泡！

• kuohao17 (2014-2-11 17:05:03)

  
  一点小体会（曾做过8KD，13KD）
  1、首先与重要的是明确目的蛋白在所用标本中的表达量，从而决定蛋白上样量（提取蛋白一定要快）；
  2、电泳过程，gel的浓度是关键，应该试试12%gel，电压100V，时间稍长些，使条带拉开，但要注意不要跑出去；
  3、转膜（PVDF），先用甲醇浸泡5-15min，然后放在transfer buffer中直到转膜时用，转膜条件：90mA,4 度过夜（湿转）；
  关于转膜肯定的是，有可能转不上，用PVDF膜绝对不存在转过去（24h内）