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【求助】IP膜蛋白

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-2-12 19:18    作者: mod=8048    来源: 分析测试百科网

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有没有人做过IP七跨膜蛋白?我试了几次,都失败了.
请问有没有比较好的protocol
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最新回复

  • 小野花 (2014-2-12 19:18:44)


    这种ip的话应该加入去污剂来溶解蛋白才能得到好的结果，最好是先提取膜蛋白来做。我做出来过跨膜10次以上的蛋白。

  • mod=8048 (2014-2-12 19:19:07)


    相关疾病：
    头痛
    非常感谢！
    请问可有具体的IP Buffer配方？我现在做的是想通过IP 膜蛋白来获得一个蛋白复合物。现在比较头疼的是去污剂到底应该怎样加，加多少

  • 小野花 (2014-2-12 19:19:40)


    IP Buffer你可以自己找到啊，只是去污剂的问题，那就要根据你的具体的膜来看了，我做类囊体膜的时候是加的1%的DM，如果是质膜的话还是参考文献来做吧，这种文献会有很多的。

  • DONT (2014-2-12 19:20:00)


    IP buffer的配方很"随意",无外乎一些常用的buffer加上detergent,另外还有EDTA,protease inhibitor之类的东西. 一般来说,如果是想寻找protein complex,用温和一些(non-denaturing)的detergent就可以了,甚至有时候用triton/NP40也可以.
    如果想IP效果好,预先的cell fraction是必须的.可以去用相应的膜蛋白裂解液,如果没有,自己先用超声(去可溶蛋白)再根据蛋白位置用digitonin extraction, 也可以达到enrichment的效果.

  • mod=8048 (2014-2-12 19:20:22)


    你现在做的怎么样了，我现在也在做细胞质膜的ＩＰ，能不能给点建议．我是想先粗提膜蛋白，再做ＩＰ，还有我的蛋白分子量很大，是个未知蛋白，但是我有它的杂交瘤上清，有没有好的方法给参考一下，谢谢

  • orangecake (2014-2-12 19:20:57)


    请问各位仁兄 什么是IP？

  • nn255 (2014-2-12 19:21:24)


    相关疾病：
    头痛
    请教同道：
    １．　用ＩＰｂｕｆｆｅｒ（ＮＰ－４０）裂解用普通提蛋白的方法来提膜蛋白可行否？
    ２．组织中膜蛋白的提取以及ＩＰ有没有特殊要求或好的方法
    ３．作为探索性实验，膜蛋白与其它蛋白的洗脱有没有特别的要求
    恳请高手不吝赐教，我做的膜蛋白MW很大，很容易解聚，外源转染表达量少，组织中内源本身也不多，还要做IP，头疼ing

  • ritou1985 (2014-2-12 19:21:45)


    gpcr? 1%的dm就可以了
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