【求助】蛋白电泳样沉不下去

最新回复

• bamboo16 (2014-2-12 19:23:03)

  
  别人用这个loading buffer也出现这种现象了吗？可能是loading buffer中没有加甘油啊！loading buffer完全可以自己配啊，分子克隆、药典上和一些参考书上都有配方。

• ero11 (2014-2-12 19:23:36)

  蛋白的上样缓冲液有问题，再重新配置吧，很简单的。TAKALA的书上就有，我们试验室一直用的。

• nvdabing (2014-2-12 19:25:50)

  QUOTE:

  原帖由 ero11 于 2014-2-12 19:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  蛋白的上样缓冲液有问题，再重新配置吧，很简单的。TAKALA的书上就有，我们试验室一直用的。

  估计是甘油浓度不够
  btw 你觉不觉的takara配5*loading buffer似乎溴酚蓝加的太多了。。。
  跑电泳是看着前面的那一大团 特别的不舒服

• vcve (2014-2-12 19:26:18)

  
  除了上样缓冲液的问题
  很可能在做胶的时候，胶孔的一些碎胶没有清理干净，
  仔细看一下，如果有清理一下。
  还有，蛋白处理后离心一下，不要吸下面的沉淀，如果有的话

• tieshazhang (2014-2-12 19:28:26)

  
  是这样的，我表达的这种蛋白（大概70KD大小）有一种特性，在40度时会聚集沉淀，低于40度则是可溶状态，如果我用100度去煮样，那会不会我需要检测的蛋白再一离心就沉下去了，而我电泳加样时是吸取的是上清，那就检测不到了。怎么办 呢？

• yonger (2014-2-12 19:29:31)

  很明显是因为你的蛋白聚集沉淀了才加不到上样孔里，我们经常遇到这种情况。你可以试试不煮样品直接上，或者在37度水浴几个小时后上样。

• zwsyrt (2014-2-12 19:29:53)

  
  在loading buffer里加点蔗糖

• ha111 (2014-2-12 19:30:16)

  
  就算你蛋白沉淀了，你的loading buffer也不至于会往上漂啊……难不成加了啥有机溶剂不成？太诡异了。反正简单得很的东西，干脆扔了重配，对吧。

• yysr238 (2014-2-12 19:30:46)

  我以前经常煮，也遇到了跟你一样的问题，后来既不离心浓缩，也不煮，干脆loading和菌液混合后马上上样（如果是发酵液，时间久了也会粘的），跑的也很好。你也试试吧。

• PCR (2014-2-12 19:31:04)

  
  我们做样品的时候，除了用5倍的buffer之外，还用过40%的蔗糖+一点点溴酚蓝，直接跟蛋白液样品混合上样，考马斯亮兰染色，没有什么问题。你也可以尝试一下。