【求助】MMPzymgraphy 图片一张 请指教

最新回复

• hot_hot_hot (2014-2-15 22:03:41)

  
  请问，您如何得知没有阳性带？？
  还有将marker的大小标出来吧。这样大家也好帮你确认条带。

• mod=8048 (2014-2-15 22:04:18)

  标准品 是MMP9 、2 大约92 和 68。
  MARK 从上到下 大约 220 150 102 76 52 38
  因在100之下 样品未见白色条带，所以我认为样品阴性
  考虑 一个 样品的MMP活性可能太低，另外 样品道上端有消化区，不知道是上样过多吗

• hot_hot_hot (2014-2-15 22:05:29)

  QUOTE:

  原帖由 mod=8048 于 2014-2-15 22:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  泳道分别为 分子量MARK， 阴性对照，中间三个为样品， 后面7个为标准品。
  样品未见明显阳性带， 但在开始有 消化区，不知道是属于上样量大的原因吗，还是DEVELOPING时间不够，阳性没显出？
  此为肾脏，上样25微克每道 ...

  样品量不大，我以前都是加50微克/20微升的样品。
  标准品做出来的话，从上样开始到跑完胶，显色这些后面的操作应该问题不大。那么是否之前的操作需要检讨？从取材到上样品之间的操作？

• mod=8048 (2014-2-15 22:05:47)

  
  要不就是样品中含的 MMP 活性太少，
  那样品道中上端，200KD以上部的消化区如何解释呢
  那我加大上样看看，DEVELOPING时间 我是37度16小时，可否再延长多少呢
  但看这样，可能还是样品中活性MMP太少了， 肾脏好象算含的多的脏器了吧
  谢谢

• hot_hot_hot (2014-2-15 22:06:19)

  QUOTE:

  原帖由 mod=8048 于 2014-2-15 22:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  要不就是样品中含的 MMP 活性太少，
  那样品道中上端，200KD以上部的消化区如何解释呢
  那我加大上样看看，DEVELOPING时间 我是37度16小时，可否再延长多少呢
  但看这样，可能还是样品中活性MMP太少了， 肾脏好象算含的多的脏器了 ...

  你的样品是如何处理的？你手上的protocol，别人能做出来阳性结果吗？

• hot_hot_hot (2014-2-15 22:07:11)

  
  我觉得既然 阳性标准品能做出来，说明方法本身是行得通的。
  我的protocol也差不多，只不过，我在提取蛋白后，比你多了一步纯化的一步，这样样品中的蛋白相对于没有那么杂。可以试一试，用minicolumn把蛋白过滤，因为目的蛋白在60-100KDa之间，MMP2和MMP9。然后再跑电泳看看吧

• ztonyc (2014-2-15 22:07:40)

  
  我也做了一次明胶酶谱，图中最亮的一行条带应该是MMP-2，估计我这种细胞没有MMP-9表达，但MMP-2下面那两条靠得比较近又有点模糊的是什么呢
  整个图片就是整个分离胶10%，底下的数字不用管，是相同的细胞不同的处理

  
  96298906.jpg

• mod=8048 (2014-2-15 22:08:05)

  
  样品中可能有其他可反应的蛋白
  除非进行蛋白纯化先
  我的带也不干净，类似的WESTERN里也有弱的杂带的