【求助】梯度凝胶电泳的胶能用来转膜做WESTERN检测吗?

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-2-15 23:20 作者: free 来源: 分析测试百科网

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【求助】梯度凝胶电泳的胶能用来转膜做WESTERN检测吗?

在下想分离一个分子量在150KD的蛋白质的糖基化和非糖基化条带,跑了8%的SDS-PAGE胶发现分子量相差的太小,看不出区别,所以想试试梯度凝胶电泳,在园子里学习了一些贴子,似乎都是电泳后要染胶的,而我想用WESTERN来检测,不知是否可行?望高手指点,多谢了.

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nut6694 (2014-2-15 23:20:41)

均一胶都跑不出来的话，我建议还是不要梯度胶了。
western 的话就更加没必要了。
free (2014-2-15 23:21:16)

因为实验室从来没有人做过梯度胶,所以对这方面完全不了解.不是说梯度胶的分辩率更高一些吗?那有更好的方法吗?
@花开花落@ (2014-2-15 23:21:45)

梯度胶的最大作用不在分离，而是在集中，他能把分子量相差很大范围的蛋白跑在一块胶上。
我想知道你的蛋白样品有问题吗？
free (2014-2-15 23:22:05)

样品没有问题,跑SDS-PAGE后做WESTERN条带都很好.
因为是做糖基化位点的突变,所以想看突变后蛋白质的分子量有无改变.目前的结果看起来似乎有变化,但是条带差别太小,结果不能肯定.
@花开花落@ (2014-2-15 23:23:09)

样品没有问题,跑SDS-PAGE后做WESTERN条带都很好.
有几条条带？
free (2014-2-15 23:23:28)

我可能没有说清楚,我是要比较野生型的蛋白质和突变型的,样品是分开上样的,所以不在同一个泳道上,是想看不同泳道上的蛋白质的分子量大小有没有区别.谢谢啦.
free (2014-2-15 23:23:48)

我试试能不能把图贴上来看看.
泳道1是野生型的蛋白质,2-7是不同的点突变,因为野生型蛋白质己经确定是一个糖蛋白,想看看各个位点突变后有没有分子量的变化.

63170260.jpg
@花开花落@ (2014-2-15 23:24:40)

看上去分子量是没有变化啊？是不是可以混合起来跑一下胶，看是否有两条带？
我想知道突变后的位点应该没有糖基化了吧？
能否看看是什么蛋白？
free (2014-2-15 23:25:03)

混起来跑这个主意还不错,我可以试试,
突变是单突变,所有能预测到的位点分别突变的,理论上来说应该有一些是有变化的.
非常感谢水满则溢的帮助.