【求助】镍柱再生时发生堵塞是什么原因？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-3-01 10:38 作者: hold住来源: 分析测试百科网

昨天用镍柱纯化His蛋白，用250的咪唑洗脱的时候蛋白检测仪显示没有蛋白下来，考虑可能是柱子里镍不够了，就按说明书再生了一次。结果在用硫酸镍过柱了一段时间后发现滴速渐渐慢了，最后就几乎堵掉了~上硫酸镍前滴速正常的，柱子一直是埋在冰水里的，硫酸镍溶液肉眼检查过没有结晶才上的，只是过柱时没有装滤盘（因为虽然蛋白上样前用0.22的滤膜滤过一次，但上样时在滤盘那里还是有点堵过不去就把滤盘卸了，不过直到上硫酸镍前的滴速都没有问题的，感觉要是蛋白堵的话早在上样的时候就堵了，不会到再生的时候才堵啊）。
不知道是什么原因？有什么办法补救吗？急死了，这东西很贵的。。。

查看完整版本请点击这里：
【求助】镍柱再生时发生堵塞是什么原因？

我也来说两句查看全部回复

最新回复

kuohao17 (2014-3-01 10:38:27)

不知道是什么原因？有什么办法补救吗？急死了，
is prepacked column or selfpacked column? if is prepacked, try use EDTA (50 mM) and salt (500 mM) to clean out Ni first, then 1 N NaOH, 6 M Gudm. if is self-packed, pour out the resin and wash with above reagent in a spinning dwon model, finally repack. don't worry, it happened to most people.
BTW, don't charge your column in ice and filter every solution you will put into column.
moonlight45 (2014-3-01 10:38:52)

我们一般都是用氯化镍
kuohao17 (2014-3-01 10:39:12)

I foget one thing, when wash prepack column, remeber up-side-down your column and reversely pump fluid to clean the blocking stuff on top of column
hold住 (2014-3-01 10:39:32)

it's QIAGEN prepacked column. you mean i should now use your method to recovery my obstructed column, and then regenerate it according to the direction again?
hold住 (2014-3-01 10:42:25)

should i use your method every time i want to regenerate it? or just when it is obstructed? then what's the reason of obstruction?
hold住 (2014-3-01 10:43:07)

I see now, it's for blocking column!
3X bullbull~I will try~
gemei0115 (2014-3-01 10:43:34)

个人猜测楼主的柱子在缓冲液中，pH是碱性的,没用水清洗,直接上镍溶液导致沉淀,如果这样可以见到柱子的上端颜色和下面的不一样,处理方法是用1mM盐酸清洗柱子,直到沉淀溶解,柱子通了再按说明书方法再生即可.
hold住 (2014-3-01 10:43:55)

what's Gudm? 1N NaOH?"M"?
avi317 (2014-3-01 10:54:56)

处理柱子的时候。EDTA,NAOH每部洗完都要用足够的水冲到中性的