【求助】SDS-PAGE电泳缓冲液的配方中甘氨酸的量？

最新回复

• wanglaoshi (2014-3-01 11:23:16)

  
  在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。
  一般甘氨酸的用量是144g/L

• toy (2014-3-01 11:23:34)

  谢谢，但是我也看到有的配方是188g/L的甘氨酸，你知道区别吗

• #甜# (2014-3-01 11:23:57)

  
  1、在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；
  2、样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
  甘氨酸是呈酸性的对不？

• toy (2014-3-01 11:24:20)

  
  道理我明白，我是说有的配方是188G

• 04906 (2014-3-01 11:24:46)

  
  疑惑中，但是一般都在用144g的，也不知道为什么？

• 33号 (2014-3-01 11:25:05)

  
  我查到的资料上，为什么甘氨酸的量是0.384mol/l，经过计算相当于28.82g/l
  这个差别了太大了吧~~~~为什吗？我用的是王廷华等编的《蛋白质理论与技术》。请问是我理解错了吗？谢谢，这是个大问题啊！

• JK.jon (2014-3-01 11:25:41)

  
  能跑出条带，两者都可。你自己摸索一下不就放心了？

• am10 (2014-3-01 11:26:41)

  
  甘氨酸的量应该关系不大。电泳缓冲液用的tris-甘氨酸缓冲液一般pH为8.3左右，不放心可以测一下。