【求助】加了buffer煮过的样品下次用时还用再煮吗？

最新回复

• tie8 (2014-3-03 10:44:01)

  QUOTE:

  原帖由 98776langtao 于 2014-3-3 10:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  上次做时加了buffer煮过的样品 没有用完，我放到了-70度冰箱里，现在想拿出来用，是该直接上样还是再煮过后上样？如果再煮有什么影响，请大家指点一下啊 ，谢谢！ ...

  不用了！

• eric930 (2014-3-03 10:44:26)

  
  没有必要在再煮了，直接上样就可以了

• kuaizige (2014-3-03 10:44:44)

  
  不用煮了 直接加可以 没有太大影响

• 98776langtao (2014-3-03 10:45:07)

  
  谢谢大家！
  但是如果已经又煮了一次会不会有什么影响啊 ？

• 98776langtao (2014-3-03 10:46:01)

  
  谢谢，我一时不知道该怎么办就又煮了一次，结果没出，会不会是这个问题呀？

• glass (2014-3-03 10:46:18)

  
  你的目的是做western吗？
  如果是的话，每次上样前应将已加入loading buffer的样品煮沸约3分钟，目的是去除蛋白的亚稳态聚合。我们在实验室进行过比较，在其它条件一致的情况下，以前煮沸当次再煮沸的western结果比以前煮沸而当次不煮沸的结果要好，目的蛋白更清晰。
  不过，不清楚样品反复这样煮沸会不会使样品降解的速度加快。但是，煮沸2-3次是没有太大问题的。
  在我们实验室，如果不是存放很长时间，加入loading buffer煮沸后的蛋白质样品放4度一周是没有问题的，在-20度大约可存放一个月。时间久了，蛋白降解会比较严重。
  蛋白质样品要尽量避免反复冻融，最好把样品多分装几管。

• 98776langtao (2014-3-03 10:47:01)

  
  我是做western的，非常感谢啊！