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• tangxin_80 (2014-3-03 15:00:04)

  
  脱脂牛奶，BSA，或者FCS，在ELISA及WB中用它们主要有两个原因：
  一是它们做为隋性蛋白，用来封闭酶标板或膜上的蛋白结合位点，使其后的蛋白不会因为非特异结合而影响本底（即所谓封闭）；
  二是在抗体等蛋白稀释到很低浓度时会不稳定，它们可以起到保护，或稳定的作用。
  如果用一般的牛奶会有很多特异性条带出现，影响结果的判断

• 箭头儿 (2014-3-03 15:00:29)

  werstern 时怎么选择分离胶浓度阿？急

• tangxin_80 (2014-3-03 15:00:56)

  QUOTE:

  原帖由 箭头儿 于 2014-3-3 15:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  werstern 时怎么选择分离胶浓度阿？急

  这个主要看你的目的蛋白的分子量了
  15%的胶可以分离10-40KD
  12%的胶可以分离12-60KD
  10%的胶可以分离20-80KD
  8%的胶可以分离30-90KD
  6%的胶可以分离50-150KD

• feima+ (2014-3-03 15:01:31)

  
  做磷酸化的western,与一般的western有何不同？谢谢！

• feima+ (2014-3-03 15:01:51)

  
  还有就是分离43KD/53KD/和66KD用什么浓度的分离胶合适？而且两个是磷酸化的，谢谢！

• tangxin_80 (2014-3-03 15:02:13)

  QUOTE:

  原帖由 feima+ 于 2014-3-3 15:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  还有就是分离43KD/53KD/和66KD用什么浓度的分离胶合适？而且两个是磷酸化的，谢谢！

  
  用甘油胶做比较好
  可以把条带分开，看的结果也比较清楚

• yychen (2014-3-03 15:02:49)

  
  我想跑一个大概8.4KD的蛋白，即泛素蛋白，该怎样配置分离胶和浓缩胶，以前用过10% 的分离胶，一直都没能跑出来，谢谢

• tangxin_80 (2014-3-03 15:05:36)

  QUOTE:

  原帖由 yychen 于 2014-3-3 15:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我想跑一个大概8.4KD的蛋白，即泛素蛋白，该怎样配置分离胶和浓缩胶，以前用过10% 的分离胶，一直都没能跑出来，谢谢

  
  我自己做过7KD的蛋白，你可以参考一下
  15%分离胶 5%浓缩胶
  恒压80-120
  湿转300mA 1h