【求助】请大家分析一下我的2-D图 背景很深

最新回复

• 吉吉0120 (2014-3-03 15:11:33)

  
  这是另一张同时跑的

  
  84942793.jpg

• yueban-1147 (2014-3-03 15:12:06)

  
  “我用硫酸链霉素去过核酸了”
  抗生素去核酸? 不明白， 沉淀吗？为什么不用其他的办法， 你的背景很可能就是抗生素引起的

• 吉吉0120 (2014-3-03 15:12:29)

  关于硫酸链霉素去核酸 之前在园子里看到有几个帖子讨论，应该是可行的
  http://www.dxy.cn/bbs/thread/9401475
  这是地址

• vvmmoy (2014-3-03 15:12:48)

  看了下你的图，不知道你跑得是什么样品。感觉你样本蛋白主要集中在4.5到5.5，这个部分的蛋白丰度很大，蛋白聚焦不完全，而其它区域的点还可以。可以考虑下用窄PH梯度的条子，或非线性的条子，或更长的条子，楼主17CM，应该是B公司的产品，G公司有24CM，分辨效果可能会更好。
  另，楼主是不是对每块胶打了一掌？碎得太利害了：）

• vvmmoy (2014-3-03 15:13:31)

  
  上样大概2.5mg ？？？
  如果定量很准确的话，这个量是不是太大了？

• 吉吉0120 (2014-3-03 15:13:52)

  绝对定量不是很准，但也差不了太多 我主要是把两个样品相对定量
  2.5mg太多了吗 我不清楚17cm胶条该怎么上样
  我看胶条说明是上样1－3mg
  量少了很多点看不到
  即便这样我觉得点还是不多

• 吉吉0120 (2014-3-03 15:14:08)

  QUOTE:

  原帖由 vvmmoy 于 2014-3-3 15:12 发表
  看了下你的图，不知道你跑得是什么样品。感觉你样本蛋白主要集中在4.5到5.5，这个部分的蛋白丰度很大，蛋白聚焦不完全，而其它区域的点还可以。可以考虑下用窄PH梯度的条子，或非线性的条子，或更长的条子，楼主17CM，应该是B公司的 ...

  谢谢你的建议 我跑的是细菌的全蛋白
  非线性的条子可能会好些 只是我这没有 也没跑过，可以尝试下
  至于更长的条子 我们没有相应的仪器可以跑了
  另外 我想问一下
  大家二向跑完剥胶后怎么染色才能避免胶破碎啊 我每次都弄得支离破碎 这次还是好的，大家用什么容器染啊

• vvmmoy (2014-3-03 15:14:34)

  
  下胶的时候，先用翘胶器翘开一点，用水笼头开小一些冲进去，拿掉空白一掉，粘胶的那块用翘胶器翘开一点，用水笼头开小一些冲进去，就很容易取下胶了，多试几次，胆大心细，一定可以成功。刚开始时，不太适应，因为从小胶变成二维电泳的大胶，有些怕，可以理解。
  祝实验成功，你第一次2D能跑这样好，很不错了。
  染色的容器，可以自己去超市去找，如：多抽屉的文件柜是不错的选择，但一定要看看抽屉下面有没有洞：）

• 吉吉0120 (2014-3-03 15:14:53)

  楼上的建议帮我解决了很多问题 非常感谢!
  继续请教
  请问非线形的胶条PH是怎么分布的
  我想买GE的PH3-7NL 和 PH 3-5.6NL 的条子
  但不知道它们具体的分布图 也没有查到
  另外 跑非线形的条子 上样量和一向的程序跟线形有什么差别吗

• 30moonriver (2014-3-03 15:15:14)

  
  胶容易碎,只要配胶的时候 减少aps的量就好了.比如原来加2克,减少到1.8克,很管用.