【求助】蛋白纯化过柱后出两个峰

最新回复

• DDD (2014-3-03 16:59:43)

  
  应该是多聚体造成的。
  用非还原电泳（不含DTT)检测一下，如果有多聚体，会在单体蛋白分子量的整数倍数的地方出现条带的。

• ssonglikihi (2014-3-03 17:00:11)

  QUOTE:

  原帖由 DDD 于 2014-3-3 16:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  应该是多聚体造成的。
  用非还原电泳（不含DTT)检测一下，如果有多聚体，会在单体蛋白分子量的整数倍数的地方出现条带的。

  请教：
  通过分子筛收获的是几种蛋白的混合物。如果真的是因为多聚体，怎么知道究竟是哪一种蛋白的多聚体？出两个峰还有别的原因吗？

• xyw5 (2014-3-03 17:00:33)

  
  先确认分子筛本身没有问题。如果是多种蛋白质的混合物，也能确定是哪一种蛋白的聚合体，要带着蛋白质的MARK，靠电泳分析手段来初步确定。
  还有一种原因应该是蛋白质和其他杂质结合造成，做电泳的时候则电泳条带一致（多在粗纯时出现）

• ssonglikihi (2014-3-03 17:01:05)

  QUOTE:

  原帖由 xyw5 于 2014-3-3 17:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  先确认分子筛本身没有问题。如果是多种蛋白质的混合物，也能确定是哪一种蛋白的聚合体，要带着蛋白质的MARK，靠电泳分析手段来初步确定。
  还有一种原因应该是蛋白质和其他杂质结合造成，做电泳的时候则电泳条带一致（多在粗纯 ...

  如果是蛋白质和其他杂质结合，怎么会出2个峰呢？
  我纯化的是病毒蛋白，由几种蛋白构成的，手头没有MARKER，在第一步粗提纯除大分子杂质时是一个峰，第二步纯化就出现了2个峰。测活性时，两个峰的差别也不大。
  到底是什么原因，请高手来帮帮我吧。

• wsll (2014-3-03 17:02:49)

  
  能说说你用的什么填料吗？
  如果是分辨率很高的Superdex的填料，它能分开的2个峰，电泳上很接近也不奇怪，毕竟电泳的时候和跑分子筛的时候，蛋白的形状是不一样的。
  分子筛并不是单纯的由分子量来分开的，蛋白的形状也有影响，链长的和链短的会不一样，还有就是不能排除蛋白间的相互作用的影响。
  不太清楚你的蛋白的来源，我之前纯化过某种酶，目的的蛋白和它的一个同源酶混在一起，也会出现你说的现象。

• NBA (2014-3-03 17:04:15)

  请教：
  通过分子筛收获的是几种蛋白的混合物。如果真的是因为多聚体，怎么知道究竟是哪一种蛋白的多聚体？出两个峰还有别的原因吗？
  
  =============================================
  
  多个蛋白怎么一定是一个峰？
  如果是多个蛋白，有可能因为分辨率提高，分离早造成

• gogo (2014-3-03 17:05:13)

  
  电泳 和分子筛的原理不同，分子筛出现两个峰电泳一个峰，不也是正常的，况且你是多个蛋白，这几个蛋白分子量一样吗？说的这么笼统，也不知道这些蛋白的大小一样不一样，还是说的具体点好

• ssonglikihi (2014-3-03 17:06:24)

  多个蛋白怎么一定是一个峰？
  如果是多个蛋白，有可能因为分辨率提高，分离早造成
  
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  过柱纯化的是灭活的病毒颗粒，其中还另外加了一种蛋白，该蛋白分子量与病毒结构蛋白分子量接近，因此电泳条带很难区分。
  请教高手：过柱后出2个峰的原因是什么？其它可以看下前面的帖子。多谢。