【求助】蛋白表达不稳定

最新回复

• vvmmoy (2014-3-03 17:07:58)

  
  我的经验是将菌重新挑单菌落进行表达，表达量会提高，并且每次表达都从平板上挑。

• nvdabing (2014-3-03 17:09:17)

  我的也是这个问题，划板重挑也还是低，不知道是啥原因，郁闷中

• vcve (2014-3-03 17:09:46)

  重新转化挑克隆看看。
  我们曾经被逼得重新构建载体，呵呵。

• hold住 (2014-3-03 17:11:07)

  
  是感受态的问题。
  一般来说用来表达的感受态菌株，长时间放置（大于两个月），经常会活性降低的。
  建议重新做感受态。如果有质粒，重新转化试表达即可。

• qianqin1977 (2014-3-03 17:11:28)

  
  新问题出来了，这些天表达一直不停，终于出结果了，表达量还很高，高兴了一天。第二天重复做又降下来了，条件一模一样，打击太大了，感觉试验像是在蒙啊！！！！！
  是不是我们质粒质量不高，转化时挑的不同质粒（同一批纯的质粒是否不均一）转化的菌表达量会不一样。
  请各位高手在帮忙分析下，不胜感激。

• dog002 (2014-3-03 17:11:51)

  
  是否热诱导？有的摇床温度随环境温度变化很大，如果是热诱导，比42℃低零点几度都会导致表达量很低。

• 大白菜 (2014-3-03 17:12:13)

  不是热诱导，普通表达

• avi317 (2014-3-03 17:16:26)

  转化时挑的不同单菌落表达量高低不同是很正常的。
  如果挑的是同一个菌落忽高忽低就是摇瓶条件的问题了。
  多挑几个转化子来摇，将高表达量的那株保个几十支种，每次摇瓶都取一支新的，看看还是否有很大的差别。
  如果还有很大的差别，将温度，接种量，诱导前的0D，诱导时间，装液量进行严格的控制，诱导前OD不要仅仅以培养时间来衡量，到了预计的时间测一下比较稳当（至少可以看出OD和表达量有多大关系），再看看是否还是忽高忽低。
  如果是随着菌种保存时间的延长表达量持续下降，那么可能就是菌种退化了，画板活化一下，一般基本能恢复正常。

• 大白菜 (2014-3-03 17:16:44)

  现在明确知道表达量与菌株有关，挑了15个菌落终于找到一株还说得过去的，正在继续，一定要找到表达量最高的。
  唯一郁闷的是，走了太多弯路，摸了那么多条件，还好及时纠正了。谢谢大家了。