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【求助】煮完的蛋白为何成胶冻状？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-08 10:25    作者: nvdabing    来源: 分析测试百科网

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【求助】煮完的蛋白为何成胶冻状？

我做的是p-Akt的WB，样本是大鼠肾组织，提出的蛋白煮沸变性后就变成胶冻状了，根本没办法上样跑电泳。
此批鼠的海马组织不久前做WB还成功过。（都放-80度）
RIPA裂解液和改良RIPA裂解液我都用过，是按照组织提蛋白的操作步骤提的，冰上裂解30分钟后离心的上清，无论是直接煮沸还是加五乘的上样缓冲液再煮，都是这样，试过煮3分钟，8分钟，10分钟。
请指教，谢谢！
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最新回复

  • mimili_901 (2014-3-08 10:26:13)


    我煮后出现大量混浊，胶东状还没见过

  • yjf1026 (2014-3-08 10:26:40)

    我的也是偶尔会有沉淀,我觉得时间不要超过5分钟,加了loading buffer后混匀一下

  • tuuu2 (2014-3-08 10:27:19)


    那是有DNA断裂
    超声一下

  • youyou99 (2014-3-08 10:27:46)


    不是蛋白浓度太高？

  • 了了 (2014-3-08 10:28:10)


    蛋白浓度太高的原因，而你加的是5 loading buffer，SDS的浓度不够高。你可以把样品稀释一下试试，就好了。

  • zhenxin (2014-3-08 10:28:39)

    这样子我也试过，可能是因为没有超声，DNA没有断裂，很粘稠所致。超声后应该就能解决。

  • duoduo (2014-3-08 10:29:10)

    很大可能是DNA未彻底断裂所致，超声时间久一些可能会好些，如果用高压匀浆处理效果可能会更好，另外loading buffer的浓度最好用高些的，4*或者6*

  • nvdabing (2014-3-08 10:29:59)


    是蛋白浓度太高了，后来稀释了就好了，煮完后有少许沉淀，离心后上样跑电泳没问题了。谢谢！
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