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【求助】BCA检测蛋白浓度偏低
【求助】BCA检测蛋白浓度偏低
我在做BCA测蛋白浓度的时候，碰到了一系列的问题。
我是把5mg的FN完全溶解于5ml的DPBS溶液中，可是稀释50倍后测出的蛋白浓度并不是20μg/ml，而是只有17μg/ml。
并且在我稀释母液蛋白溶液之后，我预期的浓度梯度为100，50，20，10，1 μg/ml，但是测出来的浓度梯度却为85，35，16，4 μg/ml，而预期中的1μg/ml根本就检测不到。并且测出来的浓度梯度根本就没有预期中的那种倍数关系。
我的BCA的检测范围是0.5～20，所以大于20的浓度我都进行了稀释之后再测，我是严格按照protocol来做的，标准曲线r值>0.995。
请问问题到底可能出在哪里？
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【求助】BCA检测蛋白浓度偏低
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最新回复
子衿青青 (2014-3-08 10:31:15)
BCA反应非线性，测定时可能出现偏差，要精度准确，做标准曲线时的点设置多些。
试剂BCA，一般最低检测限5μg/ml，
灵敏度要达到1μg/ml，必须采取加强法测定，比如样品多加几倍。
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