查看完整版本请点击这里：
【求助】高手帮我看一下哪条是MMP-9？
【求助】高手帮我看一下哪条是MMP-9？
下图是我做的MMP9的western结果，来源于大鼠的蛋白，我觉得第1条应该是MMP9，但我们这里一个做western很有经验的同学说1，2条都是杂带，第3条才是MMP9，而且之前他们做的MMP9都是在第3条带（70－80KD）的位置。
我们都是买的Santa的一抗，说明书上mmp9的位置就在90KD左右，没有那么靠下，他解释说动物种属不同，条带的位置也不同，而且一般作出的条带都会比相应的Marker位置低，对吗？能低这么多么？（因为确实第3条是最明显的！！）
我想问一下这里的高手，到底哪条才是mmp9？能帮忙解释一下这三条都是什么吗？
查看完整版本请点击这里：
【求助】高手帮我看一下哪条是MMP-9？
【求助】高手帮我看一下哪条是MMP-9？
99573853.snap.jpg
最新回复
tuomu45 (2014-3-08 10:40:36)
有没有可能1、2条是pro-mmp9和mmp9呢？
remenb (2014-3-08 10:41:03)
你的实验设计呢?阴阳性对照在哪里?WB有很明显的条带不是你的目的条带,就很难说明问题,阴阳性对照有的话能说明些问题
glass (2014-3-08 10:41:38)
QUOTE:
能说具体点么？什么“阴阳性对照”？和实验设计有什么关系？你说的是标准蛋白吧？一般标准蛋白都很贵的！
taoshengyijiu (2014-3-08 10:42:00)
mmp-9的分子量是92KD
所以LZ说的第一条带是MMP-9的话 那么pro-mmp-9的条带呢？
真正的条带可能没有做出来
我的感觉你上面的所有条带全是杂带
第三条带更不可能是你所需要的了~~~~
最好用MAPK预染一下 看看MMP-9的真正条带在那？
tuomu45 (2014-3-08 10:42:28)
QUOTE:
不好意思，我不明白“最好用MAPK预染一下 看看MMP-9的真正条带在那”是什么意思？我用的是预染Marker。
另外，pro-mmp9不是一定能做出来的吧？我看到很多人做的也都没有pro-mmp9啊！
tuomu45 (2014-3-08 10:46:09)
还有，要是这三条全是杂带的话，会是什么原因呢？是我的一抗不行吗？
3648755 (2014-3-08 10:57:19)
我们都是买的Santa的一抗，说明书上mmp9的位置就在90KD左右，没有那么靠下，他解释说动物种属不同，条带的位置也不同，而且一般作出的条带都会比相应的Marker位置低，对吗？能低这么多么？（因为确实第3条是最明显的！！）
我想问一下这里的高手，到底哪条才是mmp9？能帮忙解释一下这三条都是什么吗？
......
===============================================================================================================
如果你的marker没有问题，那么最浓的这条带很可能不是你的目的条带。要注意的是，不同公司的蛋白marker有可能有比较大的差异。我倒是建议你再试试其他公司的蛋白marker，最好不要用预染的，然后比较一下看看。
我曾经遇到过一个蛋白，理论分子量36KD，但电泳怎么跑都是45KD，后来换了国内公司的一种marker，问题就解决了，呵呵。这种可能性虽然很小，但还是建议你试一下，不用做WB，拿几家公司的Marker做一个PAGE比对一下就可以了。
祝顺利。
tuomu45 (2014-3-08 10:57:56)
fei1226com (2014-3-08 10:58:17)
试剂最好买国外进口分装好的，我想你的抗体不是很好，换一下抗体试一试，在这就是可能你的蛋白不纯，上样前没有彻底消除其他蛋白的干扰，
其余 同意楼上的兄弟的建议
祝 试验顺利！
fei1226com (2014-3-08 14:06:04)
上样前 要煮蛋白啊
还有 要 进行 蛋白定量~
tuomu45 (2014-3-08 14:07:19)
另外，请问，怎样在上样前消除其他蛋白的干扰？怎样纯化蛋白呢？
谢谢！
【求助】高手帮我看一下哪条是MMP-9？