【求助】我该选择多大的超滤膜？

最新回复

• sunnyB (2014-3-10 15:41:30)

  
  可以,进口的滤管，膜孔径的误差范围是30%

• glass (2014-3-10 15:42:56)

  
  超滤不是一种有效的分离手段。因为超滤膜的截留值是一种统计学上的平均值，而不是一种绝对值；相同分子量的蛋白也并非一定表现出同样的体积大小。也就是说50KD的膜并不能保证完全截留100－200kd的蛋白，也不能保证33－38kd的蛋白完全穿透。
  超滤一般用来浓缩蛋白或交换缓冲液，一般要求需要截留的蛋白分子量至少为超滤膜截留分子量的3－5倍，才能达到有效截留。

• laughing妹 (2014-3-10 15:43:48)

  
  多谢二位的指导！
  我想用Viva flow 50系列的膜（50kd）包，但就怕luotx站友说的那样33-38kd的蛋白并不能过膜。
  如果用100kd的能怎么样？

• qianqin1977 (2014-3-10 15:46:19)

  
  如果有条件，最好能用分子筛。superdex 75的柱，100kD以上的蛋白在外水体积。
  如果必须用超滤，100kD的应该比50kD的效果好。

• shenkunjie (2014-3-10 15:46:43)

  
  完全同意　战友的建议，这种情况90%是不能用超滤法分离的。　　我做超滤的技术支持几年了还没有见到过这种分离的，楼主三思。

• sunnyB (2014-3-10 15:47:08)

  
  也不能说完全不可以。
  我用过50kD超滤，在滤出液中能得到大部分约20kD的物质（没有滤出的有一小部分）。当然，滤出液中也有大于50kD的蛋白，但数量很少。
  所以要做到完全分离是很困难的，只能用来粗分离。

• laughing妹 (2014-3-10 15:47:27)

  
  感谢二位的帮忙！
  实验室有superdex 200（90cm）的柱子，但是上样量很少，洗脱时间很长。
  想先盐析，然后超滤，粗分离一下，顺便除盐，最后上离子交换柱（想用SP sepharose H.P.）。不行再用分子筛。
  文献上的纯化策略是盐析，透析，CM sepharose，Mono S柱。
  但是Mono S柱太贵了！所以想先用超滤纯化一下。
  希望有经验的站友继续提出宝贵意见。

• laughing妹 (2014-3-10 15:51:27)

  
  顺便问一下：
  GE公司的凝胶选择指南上说superdex 200的分离范围是10kd--600kd.
  用superdex 200纯化33-38kd的蛋白能行不？
  会不会拖尾？

• windy+++ (2014-3-10 15:52:13)

  
  superdex 75的分离范围在3kD-70kD，分辨率比200的更高，效果更好

• laughing妹 (2014-3-10 15:52:33)

  多谢提醒!
  填料挺贵的,我们实验室有剩下的Superdex 200,如果能用的话就不买新的了

• duoduo (2014-3-10 15:53:16)

  
  50kD的膜，想要30-40kD的蛋白质有很好的透过率这个不可行
  姑且不论能不能透膜，即使可以你的目标蛋白回收率会非常低，因为分子量差别非常下，本身做膜又不是严格的说50就是50的，再加上浓差极化、堵膜等效应，你的目标蛋白透过率也是非常低的。
  我看楼主的意思主要是想用超滤初分以替代mono q，我觉得mono q可以用别的相同类型的离子交换填料替换。做蛋白比较常用的还是层析，超滤个人认为价值还没有达到可以分分子量差别在两到三倍的范围内。

• laughing妹 (2014-3-10 15:54:47)

  
  多谢楼上指教！
  实验室有100 kd的viva flow 50膜包，我先用它来试试。

• 嘻嘻西西嘻嘻 (2024-1-17 14:13:32)

  我的磁珠大概10nm，一般抗体是150KD，长11nm，宽4nm，磁珠偶联抗体后，由于磁珠磁性和粒径太小无法与溶液分离，所以我想使用超滤分离偶联抗体的磁珠和未偶联在磁珠上的抗体，已知这些信息，我是否可以用150KD的超滤管把抗体超滤下来，偶联抗体的磁珠截留在超滤膜上？谢谢