【求助】wb新手急求26KD 蛋白（湿转）转膜条件

最新回复

• veiwu (2014-3-10 17:37:29)

  
  我用BIO-RAD的湿转，60V恒压转30min

• redbutterfly (2014-3-10 17:37:46)

  
  嗯,26KD不大,过夜会不会转过呢?
  我们也用的六一的，一般恒流250mA 40-50min吧~

• junjie05 (2014-3-10 17:38:11)

  我用BIO-RAD的湿转，60V恒压转30min
  效果好不
  我们正准备做小分子蛋白

• one (2014-3-10 17:38:49)

  
  PVDF 膜
  ＢＩＯ－ＲＡＤ　湿转：３００mA　６０min
  分子量在２０－７０kＤ我们都用这个条件．
  效果不错见下：
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=11551684&sty=1')

• BOSS2011 (2014-3-10 17:39:09)

  
  350mA电流转1.5h

• pengke1983 (2014-3-10 17:39:29)

  
  具体槽子 具体分子量 有其合适的转膜条件，对26KD蛋白来说不同的槽子其适合的转膜条件也会不一样，说恒压的，如果遇到槽子变宽了，两边电极变宽了加在膜和胶两边的实际电压肯定会变小，说恒流的，如果电极的横切面积变了也是不准确的。不是一个牌子的没法比较。

• 喵咪 (2014-3-10 17:41:42)

  PVDF 膜
  ＢＩＯ－ＲＡＤ　湿转：３００mA　６０min
  分子量在２０－７０kＤ我们都用这个条件．
  那nc膜的条件知道不？谢谢。

• duoduo (2014-3-10 17:43:09)

  PVDF 膜
  ＢＩＯ－ＲＡＤ　湿转：３００mA　６０min
  分子量在２０－７０kＤ我们都用这个条件．
  那nc膜的条件知道不？谢谢。
  ......
  
  ======================================
  
  这个没用过，个人感觉应该可以。

• taoshengyijiu (2014-3-10 17:43:26)

  
  100v,1h,六一的转移槽和bio-rad的都可以。

• 49888 (2014-3-10 17:43:55)

  看电流，300——400mA转膜40分钟没问题，我也用的是六一的仪器，转膜时间可适当延长，放心不会转过的。

• xiaoxiaoniao (2014-3-10 17:44:24)

  
  ......
  nc膜条件没有多大区别。
  湿转：4００mA　６０min 对２０－７０kＤ没有问题。
  我感觉转膜的时间宁可长，转出的情况我还没有碰到过。

• 阿司匹林 (2014-3-10 17:44:44)

  
  我的目的蛋白28KD PVDF 膜
  ＢＩＯ－ＲＡＤ　湿转 40v 2.5h 效果不错

• NBA (2014-3-10 17:45:01)

  
  【1】哈，我和大家的有些不同，我的转膜时间比大家要短。
  【2】我们学校以前的师兄师姐基本上是两个条件，一个是300毫安半小时，一个是380毫安半小时，用这两个条件，做的效果都挺好的。
  【3】现在我的一同学用300毫安半小时转膜，分子量分别为27和32KD，效果挺好的。我们用的都是0.45的PVDF膜。和我一起做的现在用的是380毫安25分钟（曾经用过380毫安30分钟，效果也挺好的），我们的分子量分别为42，46，47，105KD。效果都挺好的。大家看到这里，估计很多人都会说我在乱说，105KD的，你用25分钟就转好了，让人怀疑。其实我也怀疑，但这是事实。我开始是把膜剪开的，分子量46的用380毫安25分钟，105KD的用380毫安45分钟，效果都挺好，但是分开转有些麻烦。有一次我搞错了，把两张膜一起转了，后来也没办法了，就硬着头皮接着往下做了，结果曝光的条带也是很好的。从这以后，我就都用380毫安25分钟。从这可以看出，转膜的条件限制的不是很严格的，有很大的浮动度。就拿我的105KD蛋白来说，380毫安转25分钟和45分钟都可以。同时我们也会看到很多人的转膜条件相差的挺远的，但是效果还是都可以的。
  【4】估计不同的装置，不同的膜，不同的电泳液都会对转膜有影响的。
  【5】我的电泳液一般只有2次，不用第三次。我转膜时的降温措施还是比较到位的，里面有冰槽，外面加冰袋。
  【6】我对膜的处理也是比较严格的。我是先用甲醇泡沫1分钟，然后把膜放入转移液中2小时左右（我只是说我是这么做的，不是说非要这么做。有些人没这么做，曝光的条带也挺好的）。
  【7】我用的是ＢＩＯ－ＲＡＤ　迷你3的转移装置。
  【8】综上所述，转膜一般有较大的浮动范围的，限制不是很严格的。一般电流小，时间就要多一些的；电流大，时间就少一些。我不提倡转膜过夜的，感觉这就是简单问题复杂化，25分钟就能解决的问题，干嘛非要浪费一晚上！

• 喵咪 (2014-3-10 17:46:11)

  QUOTE:

  原帖由 NBA 于 2014-3-10 17:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  【1】哈，我和大家的有些不同，我的转膜时间比大家要短。
  【2】我们学校以前的师兄师姐基本上是两个条件，一个是300毫安半小时，一个是380毫安半小时，用这两个条件，做的效果都挺好的。
  【3】现在我的一同学用300毫安半小时转 ...

  能不能说一下转移缓冲液的配方，谢谢。

• NBA (2014-3-10 17:46:44)

  转移缓冲液（48mmol/L Tris，39mmol/L甘氨酸，0.037％ SDS，20％甲醇）
  甘氨酸（MW75.07） 2.9g
  Tris（MW121.14） 5.8g
  SDS 0.37g
  甲醇 200ml
  蒸馏水至 1000ml
  溶解后室温保存，次溶液可重复使用3～5次。
  上面是1×的。配制的时候可以配成10×的，用的时候取出100稀释成一升就可以了。

• 喵咪 (2014-3-10 17:47:32)

  
  确实，转膜的条件是需要摸索的，转不好，你会觉得条件一定很严格，转好了，你就会发现不像当初想象的那样严格，不过刚开始一定要严格，做熟练了就可以发挥了。我看上面的条件都差不多，我的条件是恒压100v，电流在200-400mA之间，1h，转移液使用不超过3次，用前将NC膜浸润甲醇液，再转入转移液，转移液配方同上。祝实验成功！