【求助】菌体的诱导表达

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-3-10 22:05 作者: 吉吉0120 来源: 分析测试百科网

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【求助】菌体的诱导表达

楼主好:
我做重组菌的诱导表达，今年表达出蛋白的大小却与一月份的蛋白大小不一样了。以为是菌变化了，但是提质粒做了酶切还是原来的菌。这个问题已经困扰了我近两个月了。希望能得到解答。谢谢啊

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最新回复

vvmmoy (2014-3-10 22:05:34)

蛋白大小使用SDS-PAGE做的吗？如果是的话，有时候因为胶的原因不是总能准确反映出蛋白的真是大小，建议多做几次SDS，并尽可能保证胶没问题。
daod (2014-3-10 22:05:56)

大小差多少，就象楼上说的SDS－PAGE不能准确测定分子量，一般10％的误差内都正常，药师特殊情况，比组氨酸多，上样缓冲液中SDS量不足等，误差可能更大。你的诱导条件完全和以前一样吗？如果完全一致的话，检查菌种，转接前的生长状况等！
yueban-1147 (2014-3-10 22:06:15)

是这样，我曾经遇到过好几次，冻存的菌种过一两个月再拿出来就不表达了，然后把保存的质粒重新转化一次就又可以表达。我也不知是什么原因。
nn255 (2014-3-10 22:06:43)

QUOTE:
原帖由 yueban-1147 于 2014-3-10 22:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
是这样，我曾经遇到过好几次，冻存的菌种过一两个月再拿出来就不表达了，然后把保存的质粒重新转化一次就又可以表达。我也不知是什么原因。
你用的保存菌种的甘油浓度是多少，PET重组子中若甘油浓度超过10%就会导致质粒不稳定（不过我的是15%，没发现问题）。
yueban-1147 (2014-3-10 22:07:08)

QUOTE:
原帖由 nn255 于 2014-3-10 22:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

你用的保存菌种的甘油浓度是多少，PET重组子中若甘油浓度超过10%就会导致质粒不稳定（不过我的是15%，没发现问题）。
我用的是25%
nn255 (2014-3-10 22:07:30)

QUOTE:
原帖由 yueban-1147 于 2014-3-10 22:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

我用的是25%
你的是PET重组子类么?若是的话可以试一下15%的甘油终浓度来保存,-80度2个月肯定没问题.
bananapeople (2014-3-10 22:08:19)

把它拿出来再重新划个板子，重挑个单克隆，是不是会好点的.另外也可以重新转一下.
kuaizige (2014-3-10 22:08:39)

重组质粒应该保存在克隆菌株（比如DH5alpha, XL1-blue, TOP10等），不能保存于表达宿主（如BL21(DE3)等），因为保存于表达宿主的质粒时间长以后可能发生重组、缺失，造成目的基因改变。