【求助】DNA能被硫酸铵沉淀吗？-

最新回复

• ladyhuahua (2014-3-11 19:33:46)

  
  比较难,记得曾经用2.5M也沉淀不了质粒,而且多少浓度也和DNA的浓度有关.可以用异丙醇等沉淀.

• u234 (2014-3-11 19:34:15)

  ladyhuahua说得对！DNA不像蛋白质有很多疏水补丁，因此不容易硫酸铵沉淀下来。

• any333 (2014-3-11 19:34:42)

  
  嗯，多谢两位战友。我试验试过了，70%的硫酸铵能沉淀出DNA，低浓度的不行。当然，这与DNA的浓度的确有关，如果DNA浓度足够高，50%的硫酸铵也能沉淀出DNA

• ladyhuahua (2014-3-11 19:43:20)

  
  是呀,实验只有做才知道.浓度高是容易沉淀.

• fsdd817 (2014-3-11 19:43:50)

  应该用醋酸铵吧。。后期可以挥发成氨气和二氧化碳，有利用得到纯的Dna。硫酸铵，会积累盐吧，虽然用酒精洗涤。

• glass (2014-3-11 19:44:13)

  醋酸铵是配合乙醇来沉淀的！

• nvdabing (2014-3-11 19:44:52)

  
  核酸的浓缩
  　　应用最广的核酸浓缩法是乙醇沉淀法。在中等浓度单价阳离子存在下，加入一定量的乙醇后，所形成有核酸沉淀可经离心而回收，甚至对低至pg量的DNA或RNA，也可定量回收。回收的核酸可按所需浓度，再溶于适当的缓冲液中。
  　　具体操作时，可向含样品的小离心管中加入V/10单价阳离子盐贮存液2V无水乙醇，混匀，放冰水浴中15－30min，取出目测平衡，0－4度， 12000g，离心10min。吸弃上清，再另70%乙醇0.5－1ml，12000g，0－4度洗涤离心2min。吸弃上清，沉淀用油泵抽干或打开盖子晾干后，溶于适当体积的缓冲液中。
  单价阳离子盐溶液
  　
  贮存液(mol/L) 终浓度(mol/L)
  (醋酸铵* 7.5 2.0－2.5
  LiCl 8.0 0.8
  NaCl 2.0 0.2
  醋酸钠 3.0（pH5.2) 0.3
  *：当加醋酸铵时，需加入DNA液的V/2。
  单价阳离子盐的选择，主要基于下述考虑：用醋酸铵可减少dNTP的共沉淀，但在以后要作核酸的磷酸化时应避免用醋酸铵，因铵离子是T，多核苷酸激酶的强烈抑制剂。当用较高浓度的乙醇沉淀RNA时，常用LiCl，因LiCl在乙醇中溶解度很高，不随核酸共沉淀。含有SDS的核酸样品，应使用NaCl，这时该去垢剂要70%乙醇中仍保持可溶。DNA和RNA沉淀，大多使用醋酸钠（pH5.2 ）。
  乙醇可以消除核酸的水化层，使带负电荷的磷酸基团暴露出来。Na离子之类的平衡离子能与这些带电基团结合，在沉淀形成的部位降低多核苷酸链之间的排斥作用。因此，只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀，最常用的盐是醋酸铵／氯化锂／氯化钠／醋酸钠

• tuuu2 (2014-3-11 19:45:21)

  QUOTE:

  原帖由 glass 于 2014-3-11 19:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  醋酸铵是配合乙醇来沉淀的！

  知道列。最后还是要用70%的酒精来洗涤列。看清楚再发言。。