【求助】双向电泳8000V电压上不去，是什么原因啊？

最新回复

• tangxin_80 (2014-3-12 11:23:46)

  
  盐离子！
  原因：开始的步骤因为电压比较小，所以可能勉强能达到设置的电压，但是8000V时无法聚焦，原因时胶条内离子浓度高，电阻小，电流大，达到50uA则仪器保护性的限制电压避免电流过大损坏胶条甚至仪器。
  改善方法：
  1、更换盐桥（无明显改善）
  2、样品除盐，用丙酮沉淀，或者采用2D cleanup kit
  3、重新提取蛋白，并严格控制引入的盐离子（强烈推荐）

• standbyme (2014-3-12 11:24:08)

  
  对盐离子的去除我想主要有两个方面：
  1，外源引入的盐离子；主要包括PBS残留，可使用等渗蔗糖替代PBS，配方(10 mM Tris，250 mM 蔗糖，pH7．0),高压或过滤灭菌，4°C保存。
  2，样品裂解时自身释放的盐离子（主要指细胞或组织裂解），我认为这些应该是盐离子的主要来源，可按zl13142wh兄的方法去除。本人使用2D cleanup kit，感觉能达到要求。但是这个盒子太贵，一个专门搞蛋白的朋友建议买根除盐的柱子，一来上柱量大，二来可以反复使用。

• zwsyrt (2014-3-12 11:24:27)

  
  我想知道你做的是什么组织的2D

• tuuu2 (2014-3-12 11:26:42)

  
  除盐的柱子有什么样的可选择呢？

• txwuyan (2014-3-12 11:27:01)

  
  相关疾病：
  结核病
  我做的是结核菌的总蛋白

• mimili_901 (2014-3-12 11:27:38)

  
  还可以用水化液在水化后洗胶条两次
  
  再聚焦

• mimili_901 (2014-3-12 11:27:54)

  
  我今天也碰到了这个问题，但我的样品是经过脱盐处理的不应该达不到8000v啊！以前从没出现过这个问题，这两天又白忙了一场。所以大家一起开动脑筋吧！

• txwuyan (2014-3-12 11:32:24)

  
  你可以试试让电压慢慢升上去，比如先设定到4000v，一定时间后让它升到6000v，再升到8000v，可能会好些

• eric930 (2014-3-12 11:32:44)

  
  我做的时候也是经过Cleanup处理的，丙酮沉淀也用过。两种都能很好的升压。
  上周我做的时候同样是上升不到，我的条件是先梯度升到3000V，再升到8000V，在3000V的时候我发现，然后暂停了程序，原来是我忘记了加压胶条槽的塑料板了，而且胶条槽下面有一些矿物油，于是重新覆盖了矿物油，并把胶条槽下面仔细清理了一下，压上了塑料板，之后就正常升压了。
  小细节决定了试验的失败，把我的教训写出来，希望大家借鉴。
  自己分析主要的原因可能是：1.压上了塑料板保证了电极之间的紧密接触；2.矿物油的溢出使电极之间的电阻增大。
  还请各位指导