【求助】丙酮沉淀与硫酸铵沉淀的区别

最新回复

• duoduo (2014-3-13 17:46:43)

  两者都是通过改变水的活度来沉淀大分子的
  个人感觉丙酮沉淀效果比硫酸铵沉淀的东西多一些
  我以前做过一个实验，丙酮3倍体积沉淀，上清干燥，发现里面基本没有东西了。而硫酸铵饱和沉淀以后上清干燥里面东西还是很多的。
  至于后面那个问题，当然会沉淀别的东西随着水的活度的减小，很多物质都会沉淀出来，如多糖，皂苷核酸，不知道楼主想要做什么事情，能否详细说明下。
  PS：丙酮没有饱和之说！与水任意比相溶。只有硫酸铵有饱和的问题。

• zwsyrt (2014-3-13 17:47:05)

  总体来说，沉淀能力前者强于后者；对蛋白活性的保护后者强于前者

• iii_ii (2014-3-13 17:47:29)

  
  感谢两位站友!
  是这样的:我发酵的上清液用丙酮沉淀,活性物质可以被沉淀下来,而用硫酸铵却不能。现在我想知道我的活性物质是哪一类物质，具体说是蛋白质还是非蛋白质类的？

• duoduo (2014-3-13 17:47:51)

  
  很难通过这点信息确定

• ladyhuahua (2014-3-13 17:48:12)

  
  硫酸铵沉淀是盐析的原理,一般不会影响蛋白质的活性,而丙酮则会使蛋白不可逆地失活,个人观点,敬请指教,谢谢!

• TAT (2014-3-13 17:48:43)

  
  根据这些信息的确很难推断，但还总是有些苗头的，说说自己的意见，不一定对，仅供参考：
  样品是发酵液，应该以大分子为主，饱和硫酸铵都沉淀不下来，基本可以排除蛋白，所以有可能是多肽或多糖。

• iii_ii (2014-3-13 17:49:07)

  QUOTE:

  原帖由 TAT 于 2014-3-13 17:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  根据这些信息的确很难推断，但还总是有些苗头的，说说自己的意见，不一定对，仅供参考：
  样品是发酵液，应该以大分子为主，饱和硫酸铵都沉淀不下来，基本可以排除蛋白，所以有可能是多肽或多糖。 ...

  不知道有没有这种可能：如果要是有活性的物质是蛋白质类，但量很少，从而不能被硫酸铵沉淀下来呢？
  顺便问一下，不知道有没有战友用丙酮沉淀来做分离提纯，都在提纯哪一类物质呢？为何要用丙酮沉淀来做呢？

• vivian4123 (2014-3-13 17:50:00)

  
  以前看到有人做血液里面提取蛋白用丙酮沉淀的
  书上说到有机溶剂沉淀比硫酸铵沉淀容易控制，沉淀精度更高
  另外补充一下，硫酸铵沉淀并不能将所有的蛋白都沉淀下来。我以前就碰到过有一个蛋白沉淀不完全，这个跟蛋白质自身性质有关系的，可以设想既然用饱和NaCl沉淀肯定不能沉淀一些用高浓度的硫酸铵才能沉淀的蛋白的，那我们凭什么又能够相信饱和硫酸铵就能沉淀全部蛋白呢！硫酸铵沉淀不是光光根据蛋白质的分子量的，不能贸然定论说饱和硫酸铵没有沉淀就是多肽。不过饱和硫酸铵沉淀以后蛋白含量确实很少了，你可以用测下试试的。
  个人意见，欢迎指正！
  lz，想确定是什么物质你可以先染色一下啊，初步确定下，或者扫一下紫外曲线，跑个电泳，这些基本的信息可以多获取一些。

• iii_ii (2014-3-13 17:50:23)

  紫外扫过，280nm,340nm处有吸收，SDS-PAGE有条带，但没有主带。不知道你说的染色是什么？
  另我想把丙酮沉淀物水溶后再用硫酸铵沉淀，看活性物质在沉淀里还是在上清液中，各位战友觉得这样能不能做出判断？

• wsll (2014-3-13 17:50:44)

  
  两者对目的溶液的蛋白浓度要求是不一样的，硫酸铵要求溶液总蛋白浓度接近mg级，而丙酮则可以沉淀ug级的蛋白。

• bs4665 (2014-3-13 17:51:01)

  你可以将样品用硫酸铵先沉淀完全之后，再用丙酮来沉淀你感兴趣的物质；之后跑电泳来分析差异条带，切下来取测序或者其它的分析方法都可以。
  需要注意就是在跑电泳时一定要做好对照，如直接用丙酮沉淀的沉淀和上清、直接用硫酸铵沉淀的沉淀和上清。
  由于我只做过蛋白，关于多糖和脂类没有接触过，所以以上的建议纯粹是从蛋白质角度来考虑的，欢迎指正。
  祝大家实验顺利！

• mod=8048 (2014-3-13 17:51:26)

  
  我觉得如果怀疑是多糖或是脂类，可以分别采用抽提这两种成分的方法，如多糖可以用乙醇沉淀，如果有其他有机小分子，你可以考虑用有机溶剂萃取看看。分别研究这些物质的活性，进行比较。或者你把丙酮沉淀下来的东西过柱，进行粗步分离，再去鉴定（多糖可以通过染色知道）。不知道我这么做，是不是很麻烦，欢迎指正。

• iii_ii (2014-3-13 17:51:48)

  
  感谢楼上几位战友！
  现在我这样做了一下实验：丙酮沉淀水溶液用硫酸铵级沉淀，先进行 0-55% 的硫酸铵沉淀，2h，离心，超滤测活性，有活性；再进行 55-100% 的硫酸铵沉淀，离心超滤测活性，活性弱于前者。100%沉淀上清液超滤测活，无活性。分级沉淀及沉淀上清的超滤透过液测活，无活性。沉淀水溶液的活性和沉淀前溶液（即丙酮水溶液）的比活性相比较弱许多。
  现在请教各位战友：1、以上实验能否说明活性物质在发酵液中含量极少（前面说过，发酵液直接用硫酸铵沉淀，沉淀无活性；用丙酮可以）？2、以上实验能否说明活性物质是蛋白质类？3、硫酸铵沉淀的水溶液的比活性弱的原因是什么？