【求助】跑2D电泳第一向离子浓度过高导致电压上不去

最新回复

• ending (2014-3-15 10:27:43)

  
  这么高？倒还没有碰见过，

• zhenxin (2014-3-15 10:31:04)

  
  30伏水化一般电压0或1,离子浓度高一般由于样品本身的离子或缓冲液中所带的离子,可以通过各种除盐方法如透析,沉淀等,这么高的电流会把胶条烧坏的

• 66+77 (2014-3-15 10:31:24)

  
  处理样品的时候多用低言盐pbs和纯水洗，30伏水化一般电压0或1，可先不加电压吸胀１０几个小时，把胶条背面的液体吸干，在聚焦的时候在正负极搭两个滤纸片（各加１０ul水润湿）除盐，这方法挺好，我曾经４０００Ｖ上不去了通过搭滤纸片升到了１００００Ｖ

• 831226 (2014-3-15 10:33:57)

  你说的 在聚焦的时候在正负极搭两个滤纸片，请问我用的Amsham的电泳仪 ，胶条在 holder里，怎么加滤纸啊

• yjf1026 (2014-3-15 10:34:17)

  
  滤纸片加在胶条和电极之间。

• wawa (2014-3-15 10:34:36)

  如果离子浓度太高的话,那个方法不能解决实际问题的,把样品多洗几遍,用超纯水洗,细胞样品也没事,不要怕渗透压把细胞涨破了,我做过实验涂过片子看了,涨破的只是少数(真核细胞),要是纯水能裂解细胞的话还要超声和裂解液干什么啊?

• fsdd817 (2014-3-15 10:35:24)

  
  你试试更换一下洗涤样品的试剂。你用的实0.1M的pbs吗？我最初也是用这个，电压很高，换了就好了。还有样品中的核酸也有影响啦

• 3648755 (2014-3-15 10:35:51)

  
  细胞裂解液/去污剂/蛋白酶抑制剂等原因都可以导致样品中的离子浓度过高,从而导致一向聚焦电压无法升上去,甚至严重者可出现胶条烧坏的情况.
  解决的方法:
  1>GE的2-D clean up kit: 如果有钱的话最好选用,说明书上吹得很厉害,但是我们用了后的确是有用. 基本原理也就是先用沉淀剂将蛋白沉淀下来,去除上清中含有的核酸/离子等杂质,然后用水化液溶解.既可以达到去除杂质的目的,同时也可以实现样本的浓缩.
  2> 如果没有资金的话,那么也可以选用常规的方法将蛋白沉淀:TCA/丙酮沉淀等方法

• glass (2014-3-15 10:37:41)

  
  GE 的2-D clean up试剂盒效果不错，可以用于样品脱盐

• 49888 (2014-3-15 10:49:41)

  
  GE 的2-D clean up试剂盒效果不错，可以用于样品脱盐

• fei1226com (2014-3-15 10:52:06)

  
  请问你是怎么解决的？我也遇到了同样的问题。请高手不吝赐教哦！
  用普通的滤纸就可以吗？