【求助】大家看图分析SDS-PAGE问题出在哪里？

最新回复

• ero11 (2014-3-15 10:54:58)

  
  黄色条带是ph的问题吗

• zbboom (2014-3-15 10:55:22)

  
  楼上，黄色条带是缓冲液PH的问题？怎么没人帮我分析啊！郁闷……

• PINK (2014-3-15 10:55:41)

  
  1：泳道歪掉；
  两玻璃板中间的密封怎么样？ 如果有侧漏就会出现这种扇形的泳道形状
  2：溴酚蓝在分离胶的时候会向前弥散，且跑的很快；
  你确定上下层胶的Ph值没有问题? 胶浓度呢？ 建议重新配置相关试剂 或使用其他同学结果比较可靠的试剂
  3：在前面出现红色的单一线状的条带；
  如果溴酚蓝能压成直线的话 这条红线是颜料中的某种成分 不是问题
  4：在前面会出现黄色带，好像烧焦似的。
  可能是样品中高浓度的某种试剂（比如PMSF) 也可能是产热过大 导致胶板烧焦 可考虑水浴降温 我们都是衡压跑 六一厂的电泳槽可以160V从头跑到尾 还真没注意电流多大
  图片太小 看不出太多的信息 但是最左边的胶明显没有压成直线 上下层胶的Ph很可能有问题 电泳液也不好说

• 33号 (2014-3-15 10:56:01)

  我以前也碰到类似得问题，查了好久得原因，还是没有弄清楚。最后把所有得液体都重新配过，连提蛋白的液体也都重新换了一遍，现在跑的条带终于齐。建议楼主，别浪费时间找原因了，就重新按要求把所有的液体重新配一次，再重复一遍实验吧。

• zbboom (2014-3-15 10:56:25)

  
  谢了，战友，先查PH值，假如不行，重头再来。这些试剂是我师兄配的，他也没有跑出成功的图。所以，试剂可能性较大。再次感谢！

• wood533 (2014-3-15 10:57:10)

  
  你阳极缓冲液太多了，有可能使条带向两边倾斜

• ritou1985 (2014-3-15 10:57:37)

  
  可能是电泳缓冲液的问题，请重新配过并且注意PH值；也可能是你的电极问题，电流不均匀建议用进口的；实验尽量用自己配的溶液，只相信自己

• tangxin_80 (2014-3-15 10:57:54)

  
  胶没配好，电流过大。用的是北京六一的电泳仪，应该还行。

• ero11 (2014-3-15 11:00:07)

  
  多谢战友的热情，现在前面的弥散带我已经发现原因了，是上样缓冲液的问题；气泡现在也清除了，但是还是有点歪，不过与以前相比，好多了。仪器没什么问题，现在该考虑下巴蛇 “巴蛇 ”的建议。

• tuuu2 (2014-3-15 11:00:30)

  
  首先检查一下1×SDS电泳缓冲液的PH值是否在8.3左右，另外，在恒流时检查一下电压，如果电压过高，建议用120V的电压进行分离胶的电泳。

• DONT (2014-3-15 11:00:48)

  
  首先你的下胶肯定是有问题，如果你的第三张图就是你左边电泳的结果的话，我觉得你是否在配下胶的过程中晃动了下胶；还有就是你的电泳仪不是那么好，建议你改用可以盛1.5L缓冲液的电泳槽，下边带有搅拌子，这样可以防治由于你电泳时间的延长导致的电流和温度的影响。
  你还需要注意的就是电泳用到的试剂一定要保证新鲜度，该先配置的一定要新鲜配置；试剂的保存条件你也要注意，温度的变化会导致缓冲液PH改变，可能会影响胶的聚合反应；其次在电泳的条件上你也需要做一定的改进，我觉得恒压的效果比恒流好一些，不过真正适合与你的条件就需要你根据你的样品、缓冲液以及最终的分离效果来定！
  自己的一点建议，希望对你能有所帮助！