【求助】结果背景很高，想在同一膜上重新做

最新回复

• ending (2014-3-15 15:47:57)

  
  曝光时间 短一些一秒 或者几秒终 也可以不盖暗盒的盖子 就放在上面几秒就放在显影液里 试一试

• bluelake (2014-3-15 15:48:18)

  
  我做了不同时间的，当时间短时背景减轻但目的带也就很微弱了。

• remenb (2014-3-15 15:49:19)

  
  buffer配方：
  ß-mercaptoethanol 342 µl（多一点没有关系）
  20% SDS 5 ml
  Tris-Cl pH 6.7 3.125 ml
  加ddH2O至 50 ml
  方法：
  将用过的膜浸入stripping buffer中，置50-65℃水浴箱（泡沫箱就可以，里面放个温度计，把起始温度设调到65℃，到结束后可以保持温度在50℃以上）中30-45min，间断振摇。之后用TTBS洗10min*3次，马上可以再封闭使用，或用PBS浸泡4℃报存。

• bluelake (2014-3-15 15:49:48)

  QUOTE:

  原帖由 remenb 于 2014-3-15 15:49 发表
  
  buffer配方：
  ß-mercaptoethanol 342 µl（多一点没有关系）
  20% SDS 5 ml
  Tris-Cl pH 6.7 3.125 ml
  加ddH2O至 50 ml
  方法：
  将用过的膜浸入stripping buffer中，置50-65℃水浴箱（泡沫箱就可以，里面放个温度计，把起始温度设调到 ...

  可是我没有ß-mercaptoethanol ，所以很郁闷

• xyw5 (2014-3-15 15:52:29)

  
  Buffer, 1 liter
  15 g glycine
  1 g SDS
  10 ml Tween 20
  Adjust pH to 2.2
  Bring volume up to 1 L with ultrapure water
  试试这个，用这个buffer洗膜2次，室温，每次5－10分钟
  然后用PBS或TBS洗干净，就可以重新封闭了
  PS:这是abcam介绍的stripping method

• wmp1234 (2014-3-15 15:52:51)

  
  WB的背景结果是可重复的,你stripping处理后再做WB没有效果,这个是我的总结的经验.也就是说,同一块膜第二次WB的背景肯定比第一次的深,而且第一次的背景还会在第二次的地方出现， 至于具体原因我不清楚.

• nn255 (2014-3-15 15:53:16)

  WB的背景结果是可重复的,你stripping处理后再做WB没有效果,这个是我的总结的经验.也就是说,同一块膜第二次WB的背景肯定比第一次的深,而且第一次的背景还会在第二次的地方出现， 至于具体原因我不清楚.
  
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  同意此观点，重复做背景还是高，不要浪费时间了。

• 33号 (2014-3-15 15:53:35)

  我建议你在加ECL 时，根据目的带的分子量，在目的带左右加 ECL 。其他为之不用加

• 阿k (2014-3-15 15:54:58)

  
  降低二抗的稀释比
  如果杂带多 降低一抗的稀释比