【求助】BCA法蛋白定量问题

最新回复

• 101010 (2014-3-17 23:03:12)

  
  CHAPS浓度太高，用沉淀蛋白法测蛋白浓度会比较准确

• any333 (2014-3-17 23:03:31)

  你沉淀蛋白以后，难道不用裂解液复溶蛋白吗？如果你用的话，这个问题还不是存在？

• 101010 (2014-3-17 23:03:56)

  
  并不是让你把所有蛋白都沉了，就把测的那一点给沉了就可以了，只要最后的溶液里面没有表面活性剂就好了，这个玩意有试剂盒的，我也没有仔细看是些什么成分，你可以去amersham看看

• any333 (2014-3-17 23:04:17)

  
  请问你说的 amersham的试剂盒叫什么？

• kswl870 (2014-3-17 23:04:35)

  
  会不会是你的待测蛋白浓度过高呀，
  把你的待测蛋白稀释一下看怎么样
  如果蛋白浓度过高就很容易出现这样情况

• misswu61 (2014-3-17 23:05:01)

  
  自己查查呗，好像叫2D quanti kit
  不是浓度高的问题，就是CHAPS，表面活性剂对BCA的影响相对于bradford,还小了不少呢，但是估计也要1%以下才能勉强用

• BUK (2014-3-17 23:05:25)

  
  Every protein assay kit gives a list for the maximum amout of material allowed in the protein sample without causing a noticeable intererence.
  For example, Sigma BCA protein assay kit (BCA-1 AND B 9643):
  N-acetylglucosamine in PBS 10mM
  ACES, pH 7.8 25mM
  CHAPS 5%
  .......
  We need to choice the kits which allow the existence in the sample buffer.

• junhun (2014-3-17 23:05:41)

  你裂解液里有还原剂

• standup (2014-3-17 23:06:05)

  考马斯亮蓝染色法测蛋白含量

• bongte (2014-3-17 23:06:28)

  楼上说的对。
  转一个“......BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，低浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类会对检测结果有一定影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford法测定蛋白浓度......"
  cuturl('http://ptgcn.com/bbs/archiver/?tid-1059.html')

• c86v (2014-3-17 23:07:29)

  但是，bradford对表面活性剂的忍受度要小于BCA，如果BCA都受影响了，bradford肯定不行，bradford基本就是不能有任何表面活性剂的影响

• idoww (2014-3-17 23:07:50)

  
  bio-rad公司有几种测蛋白浓度的kit，一种可以耐受表面活性剂，另一种可以耐受还原剂。你可以试试。

• caihong (2014-3-17 23:08:09)

  
  我测的结果表明bradford对活性剂耐受好于BCA，以前用bradford测没有什么问题过，但现在用BCA测老是测不对，经常出现负值。

• 红袖添香 (2014-3-17 23:09:01)

  
  我也有个问题，尿素会对Bradford法有影响吗？我用的变性液8M尿素，这样测蛋白含量是不是不准啊，而且，有一定的EDTA和巯基乙醇，这些东西如果都会影响Bradford的话，我要用什么方法测呢？