【求助】封闭、一抗、二抗，膜蛋白面朝上还是下？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-3-18 16:26 作者: 脱水萝卜来源: 分析测试百科网

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【求助】封闭、一抗、二抗，膜蛋白面朝上还是下？

问一个细节问题，转膜完毕后，在加封闭液、一抗、二抗，膜蛋白面应该朝上还是下的？为什么啊？哪位大虾可以给个正确答案

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BOSS2011 (2014-3-18 16:29:06)

一般是朝上吧，但也没有什么一定的，转移到膜上的应该是很牢固的。我们实验室里有人将两张膜背对背，加入一抗、二抗等。供参考。
kuohao17 (2014-3-18 16:30:58)

可以根据封闭液、一抗、二抗的用量多少来定,比如如果一抗的价格比较贵,为省钱就会少加点,直接点在膜上,膜蛋白面就朝上;用便宜的脱脂牛奶作为封闭液的话,就可以多加点,膜蛋白面朝下浸泡在封闭液里就行.孵育的效果以后者为佳.
不知道还有没有其他的考虑?
fei1226com (2014-3-18 16:31:14)

面朝上好点，不过我们实验室有一人面朝下，也没有什么。
huifeng0516 (2014-3-18 16:31:33)

朝上啊~因为转过的膜会沉到底面，当然有蛋白的面朝上
caihong (2014-3-18 16:31:49)

都行。我有一次忘了剪角，就两面都加ECL,两面同时用底片曝光，结果是一样的！
NBA (2014-3-18 16:32:08)

朝上啊~因为转过的膜会沉到底面，当然有蛋白的面朝上
ququer787 (2014-3-18 16:32:50)

应该是哪面朝上都可以，关键问题是要把气泡尽量排走再封口就没问题了！
bamboo16 (2014-3-18 16:34:33)

我觉得这是个习惯问题，也是个细节问题，如果你的目的蛋白丰度比较高，可能怎么做都能做出来，就算后面显影的时候无意中在膜上盖了层纸也会曝出比较漂亮的条带，但如果遇到不好做的蛋白就没那么好运了，所以，我还是建议多注意细节养成习惯，转膜的那一面蛋白在丰度上、均一性上都比背面好，封闭与孵育都最好在正面上，哪怕为了节约抗体，把两张膜叠在一起，也要背靠背！
一点愚见！
she (2014-3-18 16:35:05)

这个无所谓的，只要你认为怎么做能孵育更好，更均匀就好