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【求助】WB的重复成功率怎么这么低呢？
最近一直在做WB，只做出过一次结果，就再也不出条带了。而且我发现，只有当膜是湿润的时候条带才可以看见，一旦干了肉眼就分辨不出来了。是和蛋白表达量（抗原）有关吗？【求助】WB的重复成功率怎么这么低呢？
可是为什么就再也做不出来结果了呢？转膜是没有问题的啊，因为MARKER都转了上去，后面一抗二抗孵育就更不会有问题啊，一抗是自己的单抗，效价都1：10的5次方，我用的100倍稀释；二抗更没问题，一直都用来做ELISA的。那么为什么不出条带呢？WB的重复成功率怎么这么低呢？！
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最新回复
wmp1234 (2014-3-21 15:38:33)
我也是新手，遇到过同样问题，目前是解决了，你看下很可能是LODDING BUFFER出了问题，DTT之类的会不会坏掉了，新配一下 看看
douding66 (2014-3-21 15:39:57)
除了上样缓冲液还有别的问题吗？
flower-201 (2014-3-21 15:46:18)
我觉得关键是一抗
douding66 (2014-3-21 15:47:15)
一抗是我自己做的单抗，现在是要么做不出来，要么只要有蛋白地方都有条带，郁闷啊~！
ritou1985 (2014-3-21 15:48:13)
做出来的那一次会与目前的试验条件各方面有那些不一样呢？
douding66 (2014-3-21 15:49:46)
不知道呢~@
总体感觉WB很折磨人~!
uuooii (2014-3-21 15:50:05)
是这样子的，但是有一个体会，往往是非特异的时候没法重复的机会更大，特异的目的条带重复率高些。
douding66 (2014-3-21 15:50:34)
恩，我也这样想的，那么大家有什么好的建议，可以减少这种非特异的发生呢？（我指的是避免非目的蛋白也有条带）
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