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【求助】WB 电泳跑的太快，条带没分得太开

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-23 22:49    作者: cocacola    来源: 分析测试百科网

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【求助】WB 电泳跑的太快，条带没分得太开

这一次做的WB有点儿奇怪，
1，电泳跑完之后电泳液没有像以前那么热了
2，电泳跑的太快了，以前都是用一个半小时左右跑完，跑到底，
这次用了一个小时左右就跑到最下面了，
而且目的蛋白上下的条带相距很近，小分子量的条带倒是分的挺开的（同样浓度的gel和同样的目的蛋白以前都是在比这次更往下点，也分离得挺好）。
3，我这次跟以前不一样的只是做胶的Tris buffer新配的，会是胶的问题吗？
有谁遇到过同样的现象吗？
各位ＷＢ专家们帮我分析一下，谢谢！！
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  • sunshine039 (2014-3-23 22:50:10)


    就是它的问题，PH值差一点点都会反应在电泳上。

  • vvmmoy (2014-3-23 22:52:12)


    胶没有凝好？ 哈哈

  • cocacola (2014-3-23 22:52:31)

    是胶没有凝好就跑的快吗？小分子蛋白？？
    谢谢各位啦^^

  • 小野花 (2014-3-23 22:52:59)

    而且目的蛋白上下的条带相距很近，小分子量的条带倒是分的挺开的（同样浓度的gel和同样的目的蛋白以前都是在比这次更往下点，也分离得挺好）。

    ==============================================================================================================

    照你的意思：（同样浓度的gel和同样的目的蛋白以前都是在比这次更往下点，也分离得挺好）应该是电泳还没有完成（不知你根据什么确定跑到底了，溴酚蓝？），因为小分子蛋白还没有跑到底呀！

  • cocacola (2014-3-23 22:53:18)

    因为上样的样品有颜色，可以看到蛋白跑到哪儿了

  • zhezhe (2014-3-23 22:53:39)


    估计是你新配置的Tris-Cl的PH值不准，这个我以前也碰到过类似的事情。
    以前我的PH=8.8的buffer不准，导致条带被压，20Kda以下的条带都被溴酚蓝条带所压成一条直线，分不开。
    后来又碰到一次，更换BUFFER后，和以前的电泳相比，条带整体大幅度下移。可见buffer的PH值对电泳结果很有影响
    本来准备了一个附件图片，将两次的电泳图片对比了下，可是不知道为什么，附不上去，也许是网络问题吧。Black Eye

  • ha111 (2014-3-23 22:54:00)

    我感觉Tris-Cl的PH值在跑胶过程中并不像想象中那样大,电场的作用和胶的浓度是关键

  • cocacola (2014-3-23 22:54:19)

    我今天测过pH, Tris 8.8的pH将近9，Tris 6.8的pH将近7，就差0.2，影响有那么大吗？
    楼上的朋友说电场是关键，那么会有什么问题呢？能否说的具体点儿，比如电流呀电压等，，，，
    谢谢！！
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