【求助】蛋白诱导多出了两条带？

最新回复

• yueban-1147 (2014-3-23 23:17:50)

  
  与我前期的情况相似：我是装在6P-1上的，GST标签，GST纯化后，三条带，WB检测后三条带都带有目标蛋白的抗原性。
  现正在换标签再做。
  可能原因是：目标蛋白的部分片段的缺失。
  是什么时候产生的，不清楚，在诱导表达10分钟时就出现了：三条带都有了，只是目标蛋白加GST的融合蛋白量最多，另外两个少些。

• 小葵 (2014-3-23 23:18:11)

  
  请问你的蛋白表达后用来做什么后续实验呢？因为我是做抗体，就想知道是不是我目的蛋白的片段！

• gogo (2014-3-23 23:18:40)

  QUOTE:

  原帖由 小葵 于 2014-3-23 23:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  请问你的蛋白表达后用来做什么后续实验呢？因为我是做抗体，就想知道是不是我目的蛋白的片段！

  
  您能告诉另外两个蛋白的大概分子量吗？
  大多数是降解或提前终止！

• 小葵 (2014-3-23 23:18:59)

  
  比我的蛋白大概小10个KD左右，我的蛋白全长加上GST标签都只有40个KD左右

• TAT (2014-3-23 23:19:17)

  
  我也有这个问题，我的是pGE-5X-1，诱导除了主要表达目的蛋白外（86kd）然后也有一条96kd左右的额外带

• 小葵 (2014-3-23 23:20:15)

  杂蛋白比我的目的蛋白小，我也不知道是降解还是翻译提前终止了！我去问过老师，有的说PGEX-5X-3表达蛋白可能存在这样的问题，还有老师说没见过这种情况，我现在急着做抗体，请高手指点一下吧！

• xevin (2014-3-23 23:20:30)

  
  要是真的连过柱子也都挂下来的话，建议用原始的方法，割胶回收，用大板的SDS-PAGE制备胶，盐染，快速割下目的条带。我以前用这个方法和用镍磁珠挂HIS-tag相比反而更加干净。

• 小葵 (2014-3-23 23:20:55)

  
  但是割胶回收的蛋白没有活性，不知道会不会对我的后续实验造成影响？而且如果那两个片段就是我目的蛋白的一部分就好了

• xevin (2014-3-23 23:21:16)

  做抗体不需要蛋白有活性.
  挑最大的做,如果下面两条带是目的蛋白的一部分,抗血清里总会有识别它们的抗体.
  放心吧.

• 小葵 (2014-3-23 23:21:43)

  
  但是我要的是可以做IP的抗体，据说这种抗体只能用有活性的蛋白来做啊！