【求助】一抗比较珍贵， 所以打算回收， 请问如何才能...

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• wmp1234 (2014-3-25 10:21:57)

  
  表达条件优化过，37度，28度，IPTG的浓度也改变了，都在沉淀，最后把培养基的pH上下各调了两个单位至5.3和9.3，都在沉淀里，看来它就在包涵体里了。不知道可不可以在酶切位点之前加一段大肠杆菌的信号肽让其表达在胞外，敬请各位赐教！！而且如果可以加的话该怎么加？

• gogo (2014-3-25 10:22:16)

  
  如果在短时间保存如一周左右,可以在添加一定量的BSA以及叠氮化钠后放置4度保存;如果放置时间偏长,可以在稀释液中添加一定量的BSA和甘油以及叠氮化钠,置于-20度保存.各个组分的具体用量可以参见你的抗体说明书提供的成分说明.
  其实在实验中不建议回收使用抗体,因为本来无论是免疫组化还是ELISA等,其中涉及的各项未知因素就很多,这样会导致你在实验中中遇到问题时更加无所适从.
  
  [ 本帖最后由 gogo 于 2014-3-25 10:27 编辑 ]

• yonger (2014-3-25 10:27:59)

  
  我们的做法是：在回收的抗体中加入0.5M 的EDTA（PH8.0），每ml回收抗体加入10 微升EDTA，4度保存，可反复用两三次。

• am10 (2014-3-25 10:28:38)

  
  我们一直重复使用的
  一般放在4度冰箱，一两个月肯定没问题
  但要注意不要污染了 如果你一抗中加了脱脂奶粉 就要注意防霉

• glass (2014-3-25 10:29:33)

  
  一抗4度过夜，直接回收放到-20度，我连续用了10次都没有问题。

• vcve (2014-3-25 10:29:53)

  
  我们一抗用BSA稀释后4度存放可以反复使用很多次的, 九月份稀释的现在还用呢 效果还不错

• dog002 (2014-3-25 10:30:25)

  
  学习一下，我的单抗太贵了，正在想怎么节约一点呢，下次这么试试。

• c86v (2014-3-25 10:30:44)

  
  叠氮化钠好像对HRP不太好，想节省抗体很多好办法，一般都是用杂交膜，把膜上的有你的蛋白的那段剪下来，放杂交膜里，配好的抗体加一两毫升就够了，但是我总是觉得麻烦，看到有的实验室有那种进口的盒子，低很平，也是加很少的抗体就行，但是不知道在什么地方买的。