【求助】有谁知道从PAGE胶中纯化蛋白的方法

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-3-25 17:38 作者: 薄荷侠来源: 分析测试百科网

我现在做了一个非变性page电泳，分离出两个蛋白，现在想从胶里面纯化出来，该什么处理阿，多谢大家啦
补充一点，我的蛋白大小是100kd，好像听说用甲醇固定后就纯化不出来了

S6044 (2014-3-25 17:38:32)

问问做2D的，比如Amersham公司的技术支持，因为2D都要挖点去测序的，应该经常做这些
huifeng0516 (2014-3-25 17:42:08)

做ms只要将考染的条带切下来直接拿去做就可以了，我现在跑的是非变性胶，想要知道一条蛋白条带里面有几个蛋白，做纯度质谱，问过技术员他说要纯化的蛋白液体或冻干粉才能做，所以我现在不知道怎样从胶里面纯化出蛋白，而且量要足够大。
请各位战友帮忙啊
wmp1234 (2014-3-25 17:42:31)

LC/MS/MS?
131415 (2014-3-25 17:42:56)

这里有很多介绍蛋白技术的,也许对你有帮助.
cuturl('http://www.cnbiotech.com/html/protein/index.html')
3648755 (2014-3-25 17:43:27)

Lz好，可以直接电洗脱，可以不选择考兰染色，而选择金属离子染色法，染色时间短而且染色液不带甲醇，然后切胶电洗脱。
这里推荐0.25M CaCl2法（正染），和Zn-Imidazole负染法，尤其是后者，灵敏度比考兰要高，但金属离子染色法的条带一般保存时间都不超过30min，所以最好染完马上切。
如果你担心离子对你蛋白的影响，可以在切胶后将条带至于(0.25 M EDTA, 0.25M Tris, pH9.0) 中漂洗去除金属离子。